我们感谢青丹博士在这些实验技术的发展提供了技术投入。这项工作是支持由美国国立卫生研究院资助R01 - EY016849A和史密斯家族的新研究者奖。

第一部分：钨在玻璃电极的制备<ol><li>石墨环是放置在一个烧杯中充满了一个集中硝酸钠（0.71g/mL）和氢氧化钾（0.34g/mL）溶解于水1的解决方案，是根据修改后的缝纫机缝制的手臂放在烧杯。 </li><li>钨丝（直径0.5mm，长度6厘米）录音缝制的手臂，使其部分浸泡在溶液（1 - 2cm的）。 </li><li> 2V适用于整个钨丝附加了积极的带头缝制一只胳膊和一条负导致石墨环。 </li><li>缝纫机是开启和钨丝成溶液浸泡2分钟，电解蚀刻金属尖锐点〜4Hz的速率在反复。 </li><li>蚀刻线放置在手动显微操作和微观指导下，用一个玻璃吸管（0.25毫米OD，0.175毫米ID）拉1毫米提示与玻璃拉马轴（40倍的放大倍率）对齐点。为了防止在导线插入的运动，玻璃是暂时担保显微镜用腻子阶段。 </li><li>丝仔细先进的玻璃unpulled，上下轴，并通过1μm的开放一小片玻璃被视为断绝在视频的提示，表明了在玻璃钨紧密配合。线应延长为5 - 10mm左右，超出大鼠光纤录音提示。 </li><li>氰基丙烯酸酯应用于玻璃unpulled和硬化后的电阻抗测量，1MΩ电极一般工作最好。 </li></ol>第二部分：立体定向设置和穗列车录音<ol><li>在视频说明刺激显示系统，以及立体定位仪，定位和降低进入大脑的电极的微型硬盘。 </li><li>要执行视网膜穗列车录音大鼠麻醉后瘫痪。 （无插图）的标准程序是用于为药物输送和在麻痹（Y型管），机械通气气管插管股静脉插管手术插入。实验动物的终端。 </li><li>准备程序后，动物放在加热毯，进入立体的位置是固定的头部，耳朵和牙齿酒吧定义大鼠脑图谱2，。 </li><li>插入直肠的探头，它控制加热毯通过一个homeothermic控制单元，体温保持在37 ° C。 </li><li>金属针是用来作为导线测量心电图监测心率。 </li><li>皮肤是打开的头骨上，暴露颅骨板的交点（前囟）。定制设计的交叉帧设置到位，一个圆圈标记begma周围的头骨上，通过在了横梁上的孔，和暂时删除了横梁。 </li><li>超过前囟定位导针，脑立体定位系统校准。在显着位置一个5毫米的洞钻入颅骨和骨头去掉，露出了大脑。一个薄薄的腻子环周围放置在颅骨开放横梁，这是到位复位孔周围形成一个密封。 </li><li>如果动物在一段时间稳定的麻醉平面，这是为了防止数据收集过程中眼球运动注入与麻痹。动物是机械通气后呼吸停止。自定义程序跟踪整个实验过程中的通风和生理参数，并通知实验者如果任何参数超出正常水平，代偿性的行动是必要的。 </li><li>导针与钨电极是backloaded降低到大脑。经过大脑的渗透，交叉孔填充用琼脂（未显示）和微型硬盘大会钳位机械稳定性横。钨电极，然后慢慢地先进了导针（2μm/sec），直到提示视交叉位于下面的头骨，约8 - 9mm的。 </li><li>穗列车属于视网膜神经节细胞识别视觉输入的响应。记录细胞的感受野是一个单一的光纤隔离后映射在视觉空间，其反应特性与漂流格栅或其他感兴趣的视觉模式的特点。 3几个小时的单机录音系统的稳定性，允许。 </li></ol>材料从商业的供应商购买成人棕色挪威大鼠（250 - 400G）和受规管（12/12）光/暗周期下之内。腹腔注射盐酸氯胺酮和甲苯噻嗪（70％和2毫克/公斤，分别亨利施恩公司），麻醉诱导维持exper时间iment公司与葡萄糖，生理盐水混合静脉滴注氯胺酮和甲苯噻嗪（30和1毫克/公斤/小时），并通过导管gallamine triethiodide（40毫克/公斤/小时，菲舍尔公司）（0.13毫米外径，小部件在右股静脉）。 Gallamine包括在眼球运动瘫痪的混合物。输液泵（WPI的公司）的利率调整，需要保持一个稳定的平面麻醉心率和血压变异性评估。后瘫痪，动物是机械通气（哈佛仪器，型号683）通过必要的调整，以保持率在60-80次/ min（2CC量）气管插管，呼气末二氧化碳测量行capnometer（型号710Sp Novametrix公司）30％。体温调节通过homeothermic毯控制系统（哈佛仪器公司）。连续监测体温，呼气末二氧化碳 ，心率，血压在整个实验由LabVIEW程序。视觉刺激了索尼Multiscan 17E CRT显示器，分辨率为800x600像素在100赫兹运行（平均30 CD / M 2的亮度）。数据采集和监控输出分别控制在MATLAB和LabVIEW编写定制软件结合的视频图像处理器（剑桥研究系统公司，位+ +）和心理物理学工具箱4。动物通过隐形眼镜（眼科仪器公司）的距离观看的16.5厘米刺激显示器（40.4 x 30.2厘米），并定期眼科解决方案应用在实验过程中保持眼睛湿润。安装在立体定位仪（Stoelting合作）升高14厘米以上浮动表（以下简称丰田公司）表面的动物和设置显示器上定制设计的雪橇，在桌子上沿着反向刺激视野最大化一个± 100度弧对鼻子。这提供了一个重新定位的显示领域，扩展60度以上和35度低于眼水平± 42度横向监控中心。钨electodes是捏造的小部件公司和定制的高硼硅玻璃从弗里德里希和Dimmock公司标准micropippete拉马（萨特仪器，模型P - 97）获得获得丝，是用来塑造玻璃尖。电极阻抗测试仪是从朴电子购买。电极先进的机动微型硬盘系统（新港公司，StepperMike）。心电图及视神经信号放大和滤波与高输入阻抗的多极放大器（金控公司，X细胞3X4）。心跳检测一个窗口鉴别器（WPI的公司，型号121）。神经动作电位进行检测，并与数字穗鉴别（金控公司，APM）0.1ms的决议时间戳记。穗鉴别门控触发信号从视频图像处理器，使尖峰时间被锁定的刺激。

<ol>
	<li>Levick, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Another+tungsten+microelectrode.">Another tungsten microelectrode.</a> Med Biol Eng. 10 (4), 510-515 (1972).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The rat brain in stereotaxic coordinates. , (1998).</li><li>Freeman, D. K., Heine, W. F., Passaglia, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+maintained+discharge+of+rat+retinal+ganglion+cells.">The maintained discharge of rat retinal ganglion cells.</a> Vis Neurosci. 25 (4), 535-548 (2008).</li><li>Brainard, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+psychophysics+toolbox.">The psychophysics toolbox.</a> Spat Vis. 10, 433-436 (1997).</li></ol>

所有的实验程序批准的机构动物护理和使用委员会在波士顿大学。

光纤录音是一个有吸引力的方法，为解决有关视网膜的信息编码和传输，需要一个完整的眼的实验问题。此外，两只眼睛的信号属性，可以在几乎相同的生理状态研究中，如果电极定​​位在视交叉或道交叉和非交叉的视神经纤维的活性，可以用一个电极渗透记录。光纤录音常见于猫，但不是在其他流行的视觉研究中使用的动物模型，如啮齿类动物，也许是由于其体积小，。我们已经尝试了各种?...

single-unit in vivo recordings from the optic chiasm of rat

视觉世界的信息传递到大脑，使视神经视网膜神经节细胞轴突的动作电位序列。<em&gt;在体内</em在几种动物模型的神经节细胞尖峰列车&gt;录音揭示了什么是关于如何早期的视觉系统进程和编码的视觉信息。然而，这样的录音已经很少，其中最常见的动物模型，大鼠，可能是由于在检测小直径的轴突发射峰值困难。许多涉及大鼠视网膜病模型激励为特征，而不会干扰眼睛的神经节细胞的功能特性的需要，与人工或<em&gt;在体外</em&gt;录音。在这里，我们展示了一个用于记录神经节细胞穗列车从麻醉大鼠视交叉的方法。首先，我们显示如何制造玻璃钨电极，可以拿起电活动从单一的大鼠神经节细胞的轴突。电极的性能要优于所有我们已经尝试过的商业。然后，我们说明了我们的定制设计的立体系统<em&gt;在体内</em&gt;视觉神经生理学的实验和动物的制备及可靠和稳定的电极放置在视交叉的程序。

Watch this Scientific Journal Video about Single-unit In vivo Recordings from the Optic Chiasm of Rat at JoVE.com

Single-unit In vivo Recordings from the Optic Chiasm of Rat

视网膜神经节细胞传递视觉信息从眼睛到大脑与动作电位的序列。在这里，我们将演示如何记录单个神经节细胞动作电位<em&gt;在体内</em&gt;从麻醉大鼠。

单机在体内</em从大鼠视交叉>录音

Information about the visual world is transmitted to the brain in sequences of action potentials in retinal ganglion cell axons that make up the optic ...

single-unit-in-vivo-recordings-from-the-optic-chiasm-of-rat

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Single-unit In vivo Recordings from the Optic Chiasm of Rat

11.6K 次观看.  Boston University. 视网膜神经节细胞传递视觉信息从眼睛到大脑与动作电位的序列。在这里，我们将演示如何记录单个神经节细胞动作电位在体内从麻醉大鼠。

单机在体内录音