首先将含有冷冻小瓶的冷冻解离胚胎心脏细胞悬液放入37摄氏度的水浴中一到两分钟。将一毫升在37摄氏度下预热的完全培养基加入解冻的悬浮液中，并用移液管混合三次。然后将悬浮液转移到装有10毫米温完全培养基的15毫升锥形管中。
将整个细胞悬液通过 30 微米过滤器，并用一到两毫升温热的完全培养基冲洗过滤器。将流经的流量收集在同一锥形管中。接下来，将试管以 300 G 离心五分钟。
除去上清液后，用PBS洗涤沉淀并将细胞悬液转移到1.5毫升微管中。离心细胞悬液，并向沉淀的细胞中加入100微升提供的磁性微珠。在室温下孵育 15 分钟之前，使用宽公猪移液器吸头将悬浮液匀浆五次。
同时，用500微升结合缓冲液冲洗磁性分离柱。孵育完成后，使用500微升结合缓冲液稀释微珠细胞悬浮液混合物。接下来，向磁分离柱中加入0.6毫升细胞悬液。
将活细胞流出物收集在15毫升离心管中。接下来，使用一毫升结合缓冲液冲洗含有细胞悬液的 1.5 毫升微管。冲洗后，将结合缓冲液从1.5毫升微管转移到色谱柱中，并将流出物收集在相同的15毫升管中。
使用一毫升结合缓冲液重复冲洗1.5毫升管。将流出物以300G离心五分钟后，除去上清液而不破坏细胞沉淀。加入一毫升PBS BSA溶液，并使用宽孔移液器吸头轻轻混合。
然后将细胞悬液转移到1.5毫升微管中。再次，离心细胞悬液并在不破坏细胞沉淀的情况下去除上清液。重复两次洗涤一毫升PBS BSA。
去除一毫升PBS BSA后，将细胞重悬于100微升PBS BSA溶液中。通过移液10次混合。通过执行台盼蓝测定来确定浓度，以确保细胞计数大于或等于100， 000个细胞，并对细胞的活力进行基于荧光的评估。
解冻后分选和去除死细胞的额外步骤允许获得更清洁的细胞悬液，具有显着更高的细胞活力并改善起始样品的质量。为了获得更高的准确性，使用两种不同的计数方法来量化细胞和细胞核，包括台盼蓝和基于荧光的活力评估。在该协议中，观察到细胞活力从细胞核分离前的80%至90%降至细胞核分离后的5%以下。
