O principal objetivo deste protocolo é estudar a interação de fatores genéticos e ambientais no contexto do desenvolvimento cardíaco e sua contribuição para as cardiopatias congênitas. Abordagens de núcleos únicos, como RNA-seq de núcleo único e núcleo único atáxico, estão emergindo como métodos-chave para estudar a heterogeneidade celular na saúde e na doença durante o desenvolvimento cardíaco. Uma etapa limitante desses experimentos é que toda a amostra deve ser executada simultaneamente.
Ao trabalhar com todas as condições experimentais, coletar material fresco o suficiente para todas as condições simultaneamente pode ser um desafio. Embora tenha havido um progresso significativo no campo em célula única nos últimos anos, a principal dificuldade é o processamento de amostras livres. Evitar a dificuldade é extremamente benéfico para identificar o mecanismo molecular subjacente aos defeitos congênitos da cardiopatia.
Este protocolo descreve os passos a seguir para isolar com sucesso núcleos de alta qualidade de suspensão de células cardíacas congeladas obtidas de embriões de camundongos. E nosso protocolo é compatível com RNA-seq de núcleo único a jusante e atáxico de núcleo único. Esperamos que este procedimento ajude os pesquisadores interessados e os encoraje a usar este poderoso método em suas pesquisas.
