光晕标记蛋白的单分子成像，以研究蛋白质-缩合物相互作用

1 首先，获得表达目标光环标记蛋白和光晕 H2B 的配体染色细胞 2。3 打开显微镜系统后，4 设置活细胞孵育参数 5 并让系统平衡。6 将一滴油滴在显微镜 8 上的 7 个 100 倍 TIRF 物镜上，然后将细胞样品加载到显微镜载物台上。

9 为了识别形态健康的细胞，10 调整 Z 位置 11 并在明场照明下对细胞样品进行成像。12 裁剪视野以捕获目标细胞核。13 使用激光照明，调整 TIRF 角度 14，以实现具有单个分子的最佳信噪比 15 的 hilo 照明。

16 然后，将曝光时间设置为 500 毫秒。17 在帧之间的死区时间内，18 用 111 微瓦 405 纳米光束 20 光激活分子 19 并在每次曝光期间，用 9.1 毫瓦 640 纳米光束激发 H2B 光晕分子 21。22 连续启动 2000 帧的图像捕获 23 并在光活化分子减少后逐渐增加 405 纳米光束 24 的功率。

25 对于感兴趣的光晕标记蛋白，26 使用长通二向色镜在两个相机 27 之间分配发射波长。28 在前面演示的相同采集参数中，29 添加 JFX549 通道，每 10 秒采集 1 帧 30 并连续采集 2000 帧。