兔眼经结膜剜除后,立即将50毫升4%多聚甲醛和PBS置于冰上。15 分钟后,将眼睛转移到 100 毫米解剖培养皿中,并用 PBS 填充培养皿以防止眼睛干燥。在解剖显微镜下,使用手术刀片,开始在角膜缘前方一毫米处切开一个切口,使其与虹膜平面平行。
将弯曲的剪刀插入初始切口,然后继续沿圆周切割,与角膜缘保持一毫米的距离。然后用镊子取出角膜,用实验室湿巾轻轻擦去PBS。将角膜在室温下置于 30% 蔗糖溶液中进行冷冻保护。
用弯曲的剪刀穿过虹膜进行初步剪裁。然后在眼睛周围沿圆周切割,类似于角膜切除术,将虹膜与其他组织分开。用镊子取出虹膜,然后用实验室擦拭物轻轻擦去多余的PBS。
将鸢尾花在室温下置于 30% 蔗糖溶液中以进行冷冻保护。去除角膜和虹膜后,将眼睛放入 50 毫升 4% 多聚甲醛中,然后放在摇摇杯上轻轻搅拌。将眼睛置于 4% 多聚甲醛中,在 4 摄氏度的温度下过夜。
第二天,将眼睛放入解剖培养皿中,并用PBS填充培养皿。在解剖显微镜下,用镊子小心地抓住前晶状体囊。然后小心地将剪刀插入后房,使刀片沿着镜片向后定向。
用弯曲的剪刀初步切开镜片区域。继续通过镜片分区以圆周图案进行小切口。要确认镜片取出,请用镊子轻轻抓住前晶状体囊并尝试提起它。
分离后,将镜片置于室温下的 30% 蔗糖溶液中进行冷冻保护。将眼睛置于 50 毫升 30% 蔗糖和 PBS 中,温度为 4 摄氏度,可放置 24 至 48 小时,以提供冷冻保护。为了加快冷冻保护,请在 8 到 12 小时后用新的蔗糖溶液替换初始蔗糖溶液。