通过单步法和半自动肝素亲和层析方案分离腺相关病毒载体

在这项工作中，我们打算开发一种改进的方案，用于花叶腺相关病毒载体的生产、纯化和表征，这可以证明它们在临床前研究中的价值。尽管努力建立稳定的生产细胞系，但哺乳动物细胞中的瞬时转染仍然是AAV生产的主要工作流程。然后通过超高速密度梯度离心或依赖于病毒颗粒的生化特性的色谱技术纯化AAV。

纯化AAV的常用方法使用氯化铯或碘克沙醇密度梯度超速离心。尽管它们具有优点，但它们也有一些局限性。它们非常耗时，可扩展性有限，并且它们通常会对一些纯度低的载体产生结果。

现在，为了克服这些限制，一些研究人员已将注意力转向色谱技术。我们描述了一种基于 AAV2 肝素结合能力生成镶嵌 rAAV 的分步方案。该方法可在六天内获得高纯度和生物活性的 rAAV，从而成为一种半自动化、可扩展且具有成本效益的策略，可生成用于临床前研究的 rAAV。

在证明了该方法在生成镶嵌 rAAV 方面的适用性后，现在可以对生产系统进行微调，通过建立生产细胞系来实现更好的可扩展性和成本效益。此外，我们的目标是通过包括第二个抛光纯化步骤来去除空颗粒。