这种方法可用于解剖含有连接、十二指肠和血叶的猪胰腺,并在低温下通过洗涤剂的灌注最终去细胞化。虽然这种去细胞化的方法提供了对猪胰腺的洞察,它也可以应用于其他大型动物的胰腺。该技术的主要优点是,它有助于完整地检索复杂的器官,如胰腺,用于进一步的组织工程应用。
一般来说,个人对这种方法,他们将挣扎,因为解剖完整的胰腺,同时识别和连接所有周围的血管需要大量的实践掌握。在开始手术之前,使用一个三十五毫米硅胶管将洗涤剂容器连接到近光泵,使用第二个三到五毫米硅胶管,通过脱气器将吸气泵连接到器官室。将雄性 Luer 连接到第二管的自由端,并使用第三根三千五毫米硅胶管通过近光泵将器官室连接到洗涤剂收集容器。
最后,将两毫米未标记的移液器连接到洗涤剂容器和洗涤剂收集容器中管的释放端。然后,将去细胞化设置设置为四摄氏度。要收获胰腺,将一头肝素、45公斤重的雌性猪放在子宫内位置的解剖桌上,用手术刀从西腓过程到阴骨,进行40厘米的中线切口,以暴露腹部器官。
识别骨、十二指肠和连接叶后,找到主要的十二指肠教皇,并使用两个单独的缝合线从现场口头将十二指肠。用附加缝合线将劣质食道缝合,用剪刀在连结字之间切割,以方便胃部切除。将结缔组织与结肠分离至小肠,并分离附着在胰腺叶的结肠结缔组织。
小肠通过胰腺叶的结缔组织附着在胰腺上,但也环绕胰腺。你必须小心遵循肠道路径去分离和分离肠道和胰腺之间的结缔组织。连接动脉后,从小肠中去除结肠。
识别劣质肠静脉,下级肠动脉树,用一根缝合线将血管用到胰腺上,用剪刀切割。将脾动脉和静脉一起放在肺中,靠近脾脏,用剪刀切开脾脏。跟随十二指肠,直到十二指肠和连接叶被清除,并在结束时用两个独立的缝合线将十二指肠下水。
与连接和十二指肠叶有密切联系的十二指肠部分与胰腺一起切除,因为两个器官之间的所有小血管的连结太难了。解剖入口静脉后,用一根缝合线对血管进行缝合,以防止肝脏中任何血液泄漏,用两根缝合线解剖和缝合胆管和肝动脉。然后,用剪刀切开入口静脉、肝动脉和胆管。
找到肾静脉下大动脉,从肌肉和结缔组织解剖颅内方向的动脉,直到血管到达胰腺。现在,轻轻地翻转胰腺,解剖主动脉,保持优越的肠动脉和腹腔躯干完好无损。将主动脉颅切到腹腔躯干,钝解解周围剩余的组织,以便获得胰腺的收获。
然后,使用连接到四毫米动脉管的 50 毫升注射器将器官用溶液二冲洗通过大动脉,直到整个器官被注入或直到整个器官变冷。将溶液中两个充满的胰腺放在冰上金属托盘上,主菜朝上,用剪刀从十二指肠切割缝合线。使用 25 毫升移液器用 50 到 150 毫升超纯水冲洗十二指肠,并使用新鲜缝合线重新移植组织。
将主动脉的一端和所有分支(不包括优越的肠动脉和腹腔躯干)插入,以防止渗漏,并将四毫米动脉管插入主动脉的另一端。接下来,将胰腺放入器官室,将胰腺中的管与雄性 Luer 连接。然后,将胰腺用溶液三度注入一小时,每分钟20毫升,并在溶液四中将双注入胰腺冷冻在零下20摄氏度,直到脱细胞开始。
在开始去细胞化的当天,在摄氏四度下解冻胰腺,将解冻的胰腺放在去细胞器官室中。将洗涤剂进气管连接到胰腺的机管,在4摄氏度下以每分钟20毫升的溶液用溶液3清洗胰腺。第二天早上,将留在器官室中的任何溶液排出,并在4摄氏度下以每分钟20毫升的速度将胰腺注入30分钟。
在溶液五次灌注结束时,在溶液6至4摄氏度下,以每分钟20毫升的速度灌注胰腺8小时,随后在新鲜溶液中灌注96小时,以每分钟20毫升和4摄氏度的速度清洗。用 500 毫升 DPBS 洗涤,在 37 摄氏度下用钙和镁补充 30 分钟,然后用 250 毫升溶液 7 进行灌注,以每分钟 20 毫升和 37 摄氏度的速度进行 4 小时。然后,用新鲜溶液5分钟,每分钟20毫升,摄氏4度,再清洗器官120小时,将器官储存在溶液8中。
在这里,可以观察到正常胰腺的毛形态,它显示为浅粉色,并含有胰腺、连接和十二指肠叶。去细胞化后,粉红色丢失,加工的胰腺显示为淡白色。在正常的胰腺中,许多蓝色核通过H和E染色而明显,而在去细胞化的胰腺中,核不再能够可视化,从而确认其损失。
分离的完整的猪胰腺,按照这个程序,它将允许一个完整的灌注和成功的去细胞化,同时保持结构,也允许获得一些细胞外基质蛋白质。去细胞胰腺可用于开发具有相关细胞类型的生物反应器系统中的整器官再细胞化策略。在使用接受干细胞进行细胞再造后,组织工程胰腺可用于临床应用和药物测试。
不要忘记,使用 Triton X-100 和 SDC 可能非常危险,执行此过程时应始终采取预防措施,例如戴手套和在烟罩下准备溶液。