在 96 孔板中培养内皮细胞后，将其从培养箱中取出并使用倒置显微镜确认汇合。将板弹入水槽中以去除完整的培养基，然后用纸巾吸干板的顶部。将 HBSS HEPES 检测缓冲液加丙磺舒溶液添加到 50 mL 多通道移液器溶剂储液器中。
使用多通道移液器，向每个孔中加入 100 μL 检测缓冲液，让细胞静置 5 分钟。然后，轻弹板以去除检测缓冲液。将下载缓冲液添加到单独的 50 ml 多通道移液器溶剂储液槽中。
使用多通道移液器，向检测板的每个孔中加入 50 微升染料上样缓冲液。将板在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育 45 分钟。孵育后，在荧光显微镜下观察板以确认染料摄取。
轻弹板以去除染料溶液。在每个孔中用 50 μL HBSS HEPES 测定缓冲液加丙磺舒溶液洗涤细胞两次。轻弹板以去除检测缓冲液。
向每个孔中加入 92 μL HBSS HEPES 检测缓冲液，然后再次用荧光显微镜观察细胞，以确保多余的染料已被完全去除并且细胞保持粘附。使用多通道移液器，将两微升拮抗剂溶液和载体添加到适当的孔中。打开读板器后，将温度设置为 37 摄氏度，并孵育板 15 分钟。
测量第 1 列和第 2 列中的背景荧光，每孔执行 5 次扫描。从读板器中弹出板，然后从 8 管 PCR 条中弹出，使用多通道移液器向第 1 列和第 2 列的每个孔中快速加入 6 微升激动剂溶液。测量细胞中钙动员时荧光的变化。
对每个孔进行 20 次扫描。内皮细胞的钙动员测定表明，没有拮抗剂的阳性对照孔表现出荧光的快速增加。具有高拮抗剂浓度的孔显示出最小的荧光变化，与没有激动剂的阴性对照孔相似。
