プレートリーダーを用いたカルシウム動員アッセイによるプロテアーゼ活性化受容体のモジュレーターの特性評価(英語)

私たちの研究室では、プロテアーゼ活性化受容体の調節がどのように炎症を抑制できるかを理解するために取り組んでいます。私たちは、PAR1の活性を調節するパルモジュリンと呼ばれる新しいクラスの小分子を開発しました。目標は、薬剤候補としての可能性を秘めた特性を改善したパルモジュリンを発見し、その作用機序を理解することです。

共同研究者との前臨床試験では、パルモジュリンが腎臓、肝臓、心血管疾患など、血栓炎症によって引き起こされる疾患の治療に特に有望である可能性があると判断しました。また、その作用機序により、従来のPAR1標的薬候補よりも安全性プロファイルの高い化合物の開発が可能になる可能性もあります。受容体PAR1は血小板の活性化に重要ですが、内皮細胞でのシグナル伝達も重要であり、多くの病状に関連しています。

そのため、パルモジュリンや培養内皮細胞の活性を試験するための安価で簡便なプロトコールを開発したいと考えました。ここでは、標準的なプレートリーダーを使用し、自動リキッドハンドラーを必要としないカルシウム動員を測定する最新のプロトコルをご紹介します。内皮細胞のPAR1リガンドのスクリーニングに適していますが、理論的には、カルシウムの動員に影響を与える任意の化合物の活性を測定するために使用できます。