Caractérisation des modulateurs des récepteurs activés par la protéase à l’aide d’un test de mobilisation du calcium à l’aide d’un lecteur de plaques

Notre laboratoire s’efforce de comprendre comment la modulation des récepteurs activés par la protéase peut inhiber l’inflammation. Nous avons développé une nouvelle classe de petites molécules appelées parmodulines qui modulent l’activité de PAR1. L’objectif est de découvrir des parmodulines aux propriétés améliorées pour une utilisation potentielle en tant que candidats-médicaments, et également de comprendre leur mode d’action.

Dans des études précliniques avec nos collaborateurs, nous avons déterminé que les parmodulines pourraient être particulièrement prometteuses pour le traitement des troubles causés par la thromboinflammation, y compris les maladies rénales, hépatiques et cardiovasculaires. Leur mode d’action peut également permettre le développement de composés ayant un meilleur profil d’innocuité que les candidats médicaments ciblant PAR1 précédents. Le récepteur PAR1 est important pour l’activation des plaquettes, mais sa signalisation dans les cellules endothéliales est également importante et pertinente dans de nombreuses pathologies.

Par conséquent, nous voulions développer un protocole peu coûteux et pratique pour tester l’activité des parmodulines et des cellules endothéliales en culture. Nous sommes ici pour partager un protocole mis à jour mesurant la mobilisation du calcium qui utilise un lecteur de plaques standard et ne nécessite pas de manipulateur de liquide automatisé. Il convient au criblage des ligands PAR1 dans les cellules endothéliales, mais en théorie, il peut être utilisé pour mesurer l’activité de tout composé affectant la mobilisation du calcium.