首先,将鼠标尾巴插入限制管的顶部开口中。慢慢地将鼠标拉入管中,并将插头放在鼠标前面,以防止其逸出。要为较小的鼠标制作约束套,请在锥体的鼻子端切开,以确保鼠标的鼻子没有被阻塞并且有足够的呼吸空间。
然后剪掉圆锥体的背面,类似于鼠标的长度。如前所述,将鼠标放入管式限制器中。在握住鼠标尾巴的同时,让鼠标走进圆锥体。
将限制锥滑入管中。确保鼠标的尾巴完全伸出管子的后部,并且鼠标在锥体内有呼吸的空间。将管塞紧紧地固定在锥体的鼻子开口前方。
用温水填充 15 毫升锥形管。将装有鼠标的管式限制器放在高架平台上。将受束缚的小鼠尾巴浸入温水中至少一分钟,直到侧静脉明显扩张并可见。
将含有 1.7 毫升微量离心管的无加帽腺相关病毒或 AAV 放入试管架中。用惯用手将针头垂直插入管中。针头进入管内后,用非惯用手握住管子。
然后同时将管子和注射器抬高到与眼睛齐平,同时确保针头不接触管壁。将双臂放在桌子上,慢慢将剂量拉入注射器。将注射器中的气泡排出到一次性吸收垫上。
握住注射剂 40 秒以使其预热。确保尾静脉清晰可见后,从高架平台上取下管式限制器,将其直接放在桌子上。将鼠标放在限制器中,脚向下,以便于处理尾巴。
用纱布快速擦拭尾巴以使其干燥。然后用酒精棉签擦拭尾巴,再用干纱布擦干。将尾巴向左或向右旋转约 90 度,使两条侧静脉中的一条朝上。
在尾部的中间三分之一内找到合适的注射部位。用非惯用手握住注射部位远端的拇指和食指。将尾巴折叠在食指上,使注射部位平放在食指上。
然后向后拉尾部以拉伸它,注射部位完全水平。用惯用手的食指和中指握住注射器针筒法兰的两侧,同时保持拇指在柱塞处。将双手放在桌子上,将针头直接放在并平行于尾部和静脉上,斜面朝上。
现在向下按压针头并将其向前滑入静脉,将 AAV 溶液注射到静脉中。给药后,慢慢抽出针头并立即用纱布在注射部位加压至少 10 秒,直到出血停止。注射后荧光报告蛋白的组织学成像显示,tdTomato 在整个肝脏和股四头肌中弥漫表达,表明 AAV9 广泛到达并转导了两个组织的不同区域。