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polyethyleneimine (pei)-mediated hek293t cell transfection and post-transfection cell seeding
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02:19 min
October 11th, 2024
DOI :
10.3791/202186-v
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首先,从培养箱中取出培养HEK293T。从每个孔中吸出现有培养基,并在每个孔中加入 2 mL 新鲜培养基。对于用分裂的 R 环质粒 DNA 转染细胞,将 DNA 和 PEI 混合在 200 μL DMEM 中,每个孔位于 1.7 mL 微量离心管中。
在 8 级快速涡旋 DNA 和 PEI 约 2 秒,以确保它们充分混合形成复合物。然后在微型离心机中短暂旋转。孵育后,将混合物滴到含有细胞的六孔板中的培养基表面。
轻轻敲击板以均匀分布混合物,然后在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳的加湿培养箱中孵育 6 小时。然后,从培养箱中取出六孔板,吸出培养基,并用 2 毫升 DPBS 洗涤每个孔。去除 DPBS 后,加入 350 微升 0.05% 胰蛋白酶-EDTA 酚红。
孵育结束时,向每个孔中加入 1.7 mL 培养基以终止胰蛋白酶反应。现在,将细胞和培养基转移到 50 mL 试管中,并在台式离心机中以 300 G 离心 5 分钟。吸出培养基,并用 1 mL 新鲜培养基重悬细胞沉淀。
要将细胞接种在多聚-D-赖氨酸包被的 96 孔板中,请在 50 毫升试管中加入所需体积的细胞以及适当体积的培养基。使用多通道移液器,将 100 微升稀释的细胞悬液分配到 96 个孔中。将细胞在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳中孵育 18 小时。
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