这项工作是由美国国立卫生研究院/ NINDS格兰特R01NS070159（以TMD，JDL和ATS）的支持。

所有的实验过程中严格按照健康指南的国家机构实验动物的护理和使用进行并遵循协议＃A2011 09-003，这是审查，批准和格鲁吉亚机构动物护理和使用的监督大学委员会。 1。设备安装<ol><li> 对于开颅手术灌注系统 成年的固定化就必须插管系统，提供溶氧鱼。各种各样的系统都可以使用，但由60毫升注射器的一个简单的重力系统被使用。提高压头到一个高度，始终得到的〜1毫升/分钟的流速。此注射器可被放置在一系列与随后用于电生理灌注系统的注射器。 <ol><li>获得单个60毫升Luer锁紧接口注射器管和取出柱塞。 </li><li>暂停注射器约8＆＃160;使用一个夹子环形支架底座的上方。 </li><li>一个单向活门连接到注射器的端部。到上述活栓的另一端，连接的管件，直径2mm，这是足够长，以延伸到插管基座。 </li></ol></li><li> 对于电灌注系统 电生理实验中，它通常需要一个实验的过程中引入的各种化合物。各种各样的系统都可以使用，但组成为60ml的注射器中串联一个重力系统都可以使用。这种设置允许简单，串行介绍的解决方案，来进行通过打开相应的活塞。 <ol><li>获得两个或两个以上60毫升露儿锁注射器，并从各取下活塞。一个注射器，需要管理的栖息地水的鱼而每个后续的管可用于管理多种药理化合物的鱼。 </li><li>每个注射器连接到3 -路阀与鲁尔连接。 </li><li>使用⅛的外径（OD）油管，一端男性鲁尔锁连接注射器系列。 </li><li>固定装置，使得压头升高到27在基座上方的高度，或高度，始终得到的〜1毫升/分钟的流速。 </li></ol></li><li> 插管插管 插管套管便于引入流体的鱼。这种设置提供了灵活性和坚定性最佳位置范围内动物的嘴套管。 <ol><li>使用任何普通的剪刀（ 如 。的Fiskars）或刀片，取出从P-200枪头广角端一个1.5厘米部分。 </li><li>插入一个6cm×1毫米长的管道进入减压阀与女性鲁尔锁盖和硅胶套箍， 即图伊博斯特适配器，并插入该套管插入修饰的枪头。握住枪头与鲁尔升位置玉珠直径管材使用⅛短的部分。 <img alt="图1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51065/51065fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51065/51065fig1.jpg" /> 图1 </li></ol></li><li> 插管基地 这道菜是用来保存动物固定在一个稳定的，直立的位置，并便于清除通过插管进入动物的流体。如果不正确地建立起来，池可以发生，导致侵入振动信号中的电生理记录。 <ol><li>获得100毫米×15毫米的塑料陪替氏培养皿的底部盘。 </li><li>用焊接工具，熔体一个孔，直径6毫米和7.5毫米轮辋的凸缘下面，放入盘中的一面。使用相同的工具，熔体一个孔，直径10毫米和11毫米培养皿的唇下面〜74°逆时针从<html>较小的孔。这个洞将作为排水孔。 </li><li>插入管，直径1厘米，与端孔抬起，这样到底能不能被阻止。然后插入P-200 Pipetteman笔尖插入小孔，这将作为一个虚拟的套管。 </li><li>用培养皿稍微升高在较大孔的一侧，倒入熔化的罐头蜡放入盘中，使得所述套管孔只是覆盖。该区域将作为一个停止，使套管插入-3mm的成鱼的嘴。这一套了，应使其固化。 </li><li>用火焰加热的金属边缘，刻一个通道，使该通道从所述套管的尖端开始和大约1-2英寸延伸到保持鱼<ol><li>必须采取谨慎，以确保持续的向下的角度从套管区域给排水出口形成。065fig2.jpg“宽度=”400像素“/&gt; 图2 </li></ol></li></ol></li><li> 灌注设置 <ol><li>在开始之前，冲洗灌注调校与生境的水，确保所有气泡都被删除。 </li><li>加〜30毫升0.016的％（630μM），三卡因溶液的开颅灌注的设置，并允许约2ml到通过管道运行，以确保在灌注开始那三卡因将被传递给动物。请参阅稀释步骤2.2。 </li><li>到主灌注设置，添加〜50毫升栖息地水的第一管。任何所需的实验化合物加入其余各管。 </li><li>将套管安装到插管基座的小孔。 </li><li>搓1中的42厘米的Kimwipe宽条成紧密的螺旋，将其插入引流管，使得所述的Kimwipe两端延伸。这个组织将作为一个灯芯，除去灌注液和防止内吨液体积聚他插管基地，这可能会干扰电生理记录。 </li><li>将管子插入培养皿的大孔的一端，使下端延伸到惰性菜，是大到足以收集所有灌注浪费。这道菜将作为流出水库的设置。定位所述组织，使得一端将位于该动物的腹部区域附近和下延伸可以滴入培养皿中。 </li><li>将解剖显微镜这附近完成插管基地。插管的Luer锁连接到三卡因灌注管。 </li></ol></li><li> 毛细管针和电极 <ol><li>获得初级电极组成的2.5中的0.010银线和应取得的15在同一导线向上地设置辅助电极。为辅助电极，在0.010银导线与焊接头，这使得它能够适应部分用15在头段的背面。 <ol><li>电镀主要和次要银线与氯离子的提示。 </li><li>使用微量牵拉，拉薄壁，硼硅酸盐毛细管针与&lt;15MΩ的电阻。 <ol><li>用2-3微升的2M氯化钾，或足以部分地覆盖银导线的氯乙烯涂梢填充毛细管针。 </li><li>将主电极进入毛细管头，将其安装在电极支架。 </li><li>贴装头段成微操作，然后装入次级电极进入第二显微操作。同的设置，第一位置的各电极，然后在次级电极的焊接尖端装配到头部侧的背面。 </li></ol></li></ol></li></ol></li></ol> 2。溶液的制备，灌注系统和电生理记录设备<ol><li>得到1升的栖息地水从鱼的水族馆。 </li><li> 0.016％T]三卡因甲磺酸盐（三卡因）（50毫升630微米）24。 <ol><li>解冻的0.4％Tris缓冲三卡因，pH值7.2等分。 </li><li>增加210毫升0.4％的Tris缓冲三卡因以47.9毫升栖息地的水，混匀。 </li></ol></li><li>股票解冻所需浓度的水溶性实验化合物（ 如 300毫米戊四氮，共同chemoconvulsant）的。 </li><li>解冻的1微克/微升泮库溴铵在林格氏溶液的等分。 </li><li>请在两个麻醉和插管实验系统与生境的水沥干，至少足以从管中取出所有的泡沫。这是一定要做，因为气泡阻碍流体流动，导致动物窒息。 <ol><li>完全沥干灌注管，将持有毒品而不允许空气进入连接管。 </li><li>填写麻醉管0.016％（630微米）三卡因溶液，放置任何的experimental化合物（S）的额外管（S）对实验灌注系统。 <ol><li>实验灌注的第一管应该只包含水的栖息地。 </li></ol></li></ol></li><li>滋润小孔海绵与生境的水并置于空的60毫米×15毫米的培养皿。这道菜将被用来保存鱼而麻醉注射。 </li></ol> 3。开颅手术<ol><li>新增630微米三卡因溶液，足以15×60毫米培养皿中，以填补它大约四分之三的方式。称量填充的菜。这将用于固定所述动物以便进一步麻醉可腹膜内注射。 </li><li>沉浸动物进入含菜三卡因和权衡再三的菜。 <ol><li>减去从步骤1和2的重量之间的差值，以获得鱼​​的重量。 </li><li>让动物保持在三卡因溶液，直到平静，最运动已经停止。 </li></ol></li><li>使用对广泛的钳子，鱼转移到预润​​湿的海绵和其横向定位。由尾转印鱼可以很好地用于此过程。 <ol><li>将解剖显微镜下的海绵和鱼类。 </li></ol></li><li>与含有34号针头一个Nanofil注射器，测量出足够泮库溴铵，使得在1微克/克的鱼的重量。 </li><li>用冰棒棍沿着鱼的背侧拿着它不晃，管理泮库溴铵腹腔使用Nanofil注射器。 </li><li>用细镊子，由下颌抢鱼和迅速的动物转移到插管基​​地。 </li><li>定位的动物，使得它是蜡形式并且使得1毫米插管可以被插入到该口上背起来。用细镊子操纵鱼和周围的套管开这个口。由于插管托盘的妆容，止损被设计成底座，使插管将要插入3毫米成鱼的口中。 <ol><li>一旦就位，打开包含三卡因的重力式输液管。 </li></ol></li><li>切Kimqipe组织一个3 平方厘米一节，并与栖息地的水弄湿了。 <ol><li>将组织在动物，以防止干燥。的Kimwipe擦拭部也可以被定位在保持该动物背起来以帮助。 </li></ol></li><li>在解剖显微镜下，用万纳春风似剪刀去除头盖骨覆盖视顶盖的〜2个平方毫米截面。这个区域看起来像一个黑暗的，硬骨板，它位于眼睛的后面。 <img alt="图3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51065/51065fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51065/51065fig3.jpg" width="400px" /> 图3 <ol><li>插入万纳剪刀的一个叶片在所述板的边缘，并以足够的力量推向穿透忒骨，没有刺入大脑。关闭剪刀剪断骨头。 </li><li>取出骨片。 </li><li>如果有任何血液存在，除去使用的Kimwipe的边缘。在进行开颅手术后不久，一般出血停止。 </li></ol></li></ol> 4。电<ol><li>关闭插管停止公鸡和迅速断开鲁尔锁插管基础连接到三卡因滴。 <ol><li>将完好插管设置的电镜和连接到灌注系统。 </li><li>打开的栖息地水和灌注以1毫升/分钟〜1小时的速率，以洗出三卡因。 </li></ol></li><li>使用视觉控制下的显微操作器，定位辅助电极，使得电极尖端可插入动物的鼻孔或成上颚后面的倾角。 </li><li>将主电极针插入开颅开幕。将针进入组织中，使得所述顶端位于所述视顶盖内相当肤浅。 <ol><li>如果电极是太深，该电信号可以是小的。 </li></ol></li><li>收集和分析主要和次要参比电极之间所记录的电差。这个过程将允许以获得细胞外记录。 <ol><li>收集在无间隙模式中的数据在一个5 kHz的采样率，以0.1千赫的低通滤波器和1赫兹的高通滤波器。 </li><li>不要开始录制电生理活动，直到栖息地的水已经灌注了至少45分钟。 </li><li>记录本地活动的基准至少15分钟，然后加入实验药物。开始灌注实验性药物的选择和记录所需的时间量。在健康的制剂，它能够记录的神经活动为2-3小时。 </li></ol></li></ol> 5。清理</P&gt; <ol><li>在实验结束时，从头盖骨和鼻孔取出电极和取出插管设置。 <ol><li>安乐死的动物通过按照公认的做法用三卡因药物过量，概述了美国兽医协会（AVMA）准则动物的安乐死（2013年）。 </li><li>斑马鱼被安乐死应该被放置在在200-500毫克/升。一个三卡因溶液鱼将被留在了至少10分钟，停止节奏鳃盖活动后，之后，对它们进行安乐死（颈横断）的物理方法以确保死亡的溶液。 </li></ol></li><li>断开螺口插管底座连接到灌注设置。收集在适当的处置灌注系统中的任何剩余的液体。 <ol><li>透过所有管道运行去离子水，并收集相应的处理，如果危险。 </li></ol></li><li>消毒灌注系统，r为取消70％的乙醇透过所有管道和收集适当处置。 <ol><li>离开旋塞每个管在打开位置，以促进空气干燥。 </li><li>泡在电极中70％的乙醇，并允许在空气中干燥。 </li></ol></li><li>出售用于在一个尖锐物品容器的主电极的毛细管针。 </li><li>拆除插管设置和冲洗所有作品水。 <ol><li>清理每一块用70％乙醇和风干。 </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Henze, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+features+predicted+by+extracellular+recordings+in+the+hippocampus+in+vivo.">Intracellular features predicted by extracellular recordings in the hippocampus in vivo.</a> J. Neurophysiol. 84, 390-400 (2000).</li><li>Gabriel, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+pattern+in+the+adult+zebrafish+spinal+cord+in+vitro.">Locomotor pattern in the adult zebrafish spinal cord in vitro.</a> J.Neurophysiol. 99, 37-48 (2008).</li><li>Vargas, R., Johannesdottir, I. T., Sigurgeirsson, B., Thornorsteinsson, H., Karlsson, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+brain+in+research+and+teaching:+a+simple+in+vivo+and+in+vitro+model+for+the+study+of+spontaneous+neural+activity.">The zebrafish brain in research and teaching: a simple in vivo and in vitro model for the study of spontaneous neural activity.</a> Adv Physiol Educ. 35, 188-196 (2011).</li><li>Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inexpensive+device+for+non-invasive+electroretinography+in+small+aquatic+vertebrates.">An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates.</a> J. Neurosci. Methods. 135, 205-210 (2004).</li><li>Brockerhoff, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+behavioral+screen+for+isolating+zebrafish+mutants+with+visual+system+defects.">A behavioral screen for isolating zebrafish mutants with visual system defects.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.. 92, 10545-10549 (1995).</li><li>Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pentylenetetrazole+induced+changes+in+zebrafish+behavior,+neural+activity+and+c-fos+expression.">Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression.</a> Neuroscience. 131, 759-768 (2005).</li><li>Baraban, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+large-scale+mutagenesis+screen+to+identify+seizure-resistant+zebrafish.">A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish.</a> Epilepsia. 48, 1151-1157 (2007).</li><li>Maximino, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Serotonin and anxiety: Neuroanatomical, pharmacological and functional aspects. , (2012).</li><li>Bally-Cuif, L., Vernier, P., Perry, S. F., Ekker, M., Farrell, A. P., Brauner, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fish Physiology: Zebrafish. 29, (2010).</li><li>Kaslin, J., Nystedt, J. M., Ostergard, M., Peitsaro, N., Panula, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+orexin/hypocretin+system+in+zebrafish+is+connected+to+the+aminergic+and+cholinergic+systems.">The orexin/hypocretin system in zebrafish is connected to the aminergic and cholinergic systems.</a> J. Neurosci. 24, 2678-2689 (2004).</li><li>McLean, D. L., Fetcho, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+and+innervation+patterns+of+dopaminergic,+noradrenergic,+and+serotonergic+neurons+in+larval+zebrafish.">Ontogeny and innervation patterns of dopaminergic, noradrenergic, and serotonergic neurons in larval zebrafish.</a> J. Comp. Neurol. 480, 38-56 (2004).</li><li>Mueller, T., Vernier, P., Wullimann, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adult+central+nervous+cholinergic+system+of+a+neurogenetic+model+animal,+the+zebrafish+Danio+rerio.">The adult central nervous cholinergic system of a neurogenetic model animal, the zebrafish Danio rerio.</a> Brain Res. 1011, 156-169 (2004).</li><li>Higashijima, S., Schaefer, M., Fetcho, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotransmitter+properties+of+spinal+interneurons+in+embryonic+and+larval+zebrafish.">Neurotransmitter properties of spinal interneurons in embryonic and larval zebrafish.</a> J. Comp. Neurol. 480, 19-37 (1002).</li><li>Tao, L., Lauderdale, J. D., Sornborger, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+Functional+Connectivity+between+Neuronal+Ensembles+with+Larval+Zebrafish+Transgenic+for+a+Ratiometric+Calcium+Indicator.">Mapping Functional Connectivity between Neuronal Ensembles with Larval Zebrafish Transgenic for a Ratiometric Calcium Indicator.</a> Front Neural Circuits. 5, 2 (2011).</li><li>Fan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+statistical+methods+enhance+imaging+of+cameleon+fluorescence+resonance+energy+transfer+in+cultured+zebrafish+spinal+neurons.">New statistical methods enhance imaging of cameleon fluorescence resonance energy transfer in cultured zebrafish spinal neurons.</a> J Biomed Opt. 12, 034017 (2007).</li><li>Burgess, H. A., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensorimotor+gating+in+larval+zebrafish.">Sensorimotor gating in larval zebrafish.</a> J. Neurosci. 27, 4984-4994 (2007).</li><li>Burgess, H. A., Schoch, H., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+retinal+pathways+drive+spatial+orientation+behaviors+in+zebrafish+navigation.">Distinct retinal pathways drive spatial orientation behaviors in zebrafish navigation.</a> Curr. Biol. 20, 381-386 (2010).</li><li>Mueller, K. P., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+neurobiology:+how+larval+fish+orient+towards+the+light.">Behavioral neurobiology: how larval fish orient towards the light.</a> Curr. Biol. 20, 159-161 (2010).</li><li>Haug, M. F., Biehlmaier, O., Mueller, K. P., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+acuity+in+larval+zebrafish:+behavior+and+histology.">Visual acuity in larval zebrafish: behavior and histology.</a> Front. Zool. 7, 8 (2010).</li><li>Fetcho, J. R., Higashijima, S., McLean, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+and+motor+control+over+the+last+decade.">Zebrafish and motor control over the last decade.</a> Brain Res.Rev. 57, 86-93 (2008).</li><li>Connaughton, V. P., Nelson, R., Bender, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+evidence+of+GABAA+and+GABAC+receptors+on+zebrafish+retinal+bipolar+cells.">Electrophysiological evidence of GABAA and GABAC receptors on zebrafish retinal bipolar cells.</a> Vis. Neurosci. 25, 139-153 (2008).</li><li>Kim, Y. J., Nam, R. H., Yoo, Y. M., Lee, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+functional+evidence+of+GABAergic+neurons+in+parts+of+the+brain+of+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Identification and functional evidence of GABAergic neurons in parts of the brain of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Neurosci. Lett. 355, 29-32 (2004).</li><li>Sato, Y., Miyasaka, N., Yoshihara, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hierarchical+regulation+of+odorant+receptor+gene+choice+and+subsequent+axonal+projection+of+olfactory+sensory+neurons+in+zebrafish.">Hierarchical regulation of odorant receptor gene choice and subsequent axonal projection of olfactory sensory neurons in zebrafish.</a> J. Neurosci. 27, 1606-1615 (2007).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book: a guide for the laboratory use of zebrafish (Brachydanio rerio). , (1993).</li><li>Lazarova, M., Samanin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potentiation+by+yohimbine+of+pentylenetetrazol-induced+seizures+in+rats:+role+of+alpha+2+adrenergic+receptors.">Potentiation by yohimbine of pentylenetetrazol-induced seizures in rats: role of alpha 2 adrenergic receptors.</a> Pharmacol. Res. Commun. 15, 419-425 (1983).</li><li>Loscher, W., Honack, D., Fassbender, C. P., Nolting, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+technical,+biological+and+pharmacological+factors+in+the+laboratory+evaluation+of+anticonvulsant+drugs.+III.+Pentylenetetrazole+seizure+models.">The role of technical, biological and pharmacological factors in the laboratory evaluation of anticonvulsant drugs. III. Pentylenetetrazole seizure models.</a> Epilepsy res. 8, 171-189 (1991).</li><li>DeMicco, A., Cooper, K. R., Richardson, J. R., White, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+neurotoxicity+of+pyrethroid+insecticides+in+zebrafish+embryos.">Developmental neurotoxicity of pyrethroid insecticides in zebrafish embryos.</a> Toxicol Sci. 113, 177-186 (2010).</li><li>Arnolds, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+effects+of+tricaine+on+the+supramedullary/dorsal+neurons+of+the+cunner,+Tautogolabrus+adspersus.">Physiological effects of tricaine on the supramedullary/dorsal neurons of the cunner, Tautogolabrus adspersus.</a> Biol. Bull. 203, 188-189 (2002).</li></ol>

作者宣称，他们有没有竞争的财务权益。

此协议已被用于测量体内成年斑马鱼的神经活动。通过练习，神经活动可以持续观察，虽然记录的活动的特征（振幅和事件的形状）可以鱼个体之间有所不同。细胞外记录技术的运用可以解释这一观察。该方法提供同时监测大量的区域1内的细胞，所以变化的主电极的定位，可以在观察到的活性中发挥作用。主电极的深度也改变被测量的区域。如果电极的尖端的区域内放置过深，所?...

在这篇文章中，协议描述为获得在成年斑马鱼的神经活动体内录音。细胞外记录方法被使用，以提供神经组织的一个小的区域内的电活动的电压测量。调查此方法涉及监测在表现动物1有大量的细胞。此前，记录片已在成人和幼虫进行，因为有眼杯的筹备和视网膜电录音。这些实验基本上都被执行细节的各种感觉系统2-5的生理反应。直到最近，完整的大脑准备工作仅是可利用的与斑马鱼幼虫3,6,7，其中呼吸和氧的扩散可能发生通过皮肤进行电。我们准备允许成年斑马鱼的原生神经活动，而动物保持完全清醒，并意识到o到被测量f及其周边地区。 斑马鱼（ 斑马鱼 ）当前播放的一个典范遗传，毒理学，药理学和病理生理学研究3的基础性作用。斑马鱼已经获得了神经科学领域内的知名度，因为它们与哺乳动物在遗传，神经和内分泌水平8有着广泛的同源性。在过去的十年中，标准神经解剖学和免疫组化技术已被用来确定不同的神经递质3,8,13的分布和斑马鱼神经系统9-12的具体特征的组织。最近，研究人员已经将工作重点转向功能研究14,15，其中许多集中在行为过程16-19和感觉系统2,13,20的电生理特性。少数这些研究都集中在了Adul的特定区域的电活动吨斑马鱼脑部21-23，但没有进行使用体内的方法。 这个协议可以适于自发和诱发活性的斑马鱼神经系统来描述在特定脑区活动模式中的电生理学研究。使用这种技术的允许的年轻幼虫阶段和成人的神经活动之间作出比较。此外，我们的协议允许遗传或药理改变之间的比较。连同其他的方法，如基因工程或药理学试验，这种方法提供了用于神经元沟通和可塑性的完好成年动物以及潜在的应用，如研究迟发性癫痫或神经变性过程的功能分析的新可能性。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="539">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:91px;">Decon Laboratories</td>
			<td style="width:111px;">2750HC</td>
			<td style="width:132px;">Dilute 100% to 70% with DI water</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:207px;">2 M Potassium Chloride</td>
			<td style="width:91px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:207px;">2 M Sodium Chloride</td>
			<td style="width:91px;">J.T. Baker</td>
			<td style="width:111px;">3624-05</td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:207px;">0.4% Tris-Buffered Tricaine</td>
			<td style="width:91px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:111px;">E10521</td>
			<td style="width:132px;">pH 7.2-7.4; stored at -20 oC</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:207px;">Pancuronium Bromide</td>
			<td style="width:91px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:111px;">P1918</td>
			<td style="width:132px;">Diluted to 1 &#956;g/&#956;l in 1x phosphate buffered saline</td>
		</tr>
		<tr height="127">
			<td height="127" style="height:127px;width:207px;">Habitat water</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;">pH 7.0-7.4, conductivity of 400-450 &#956;S; maintained by Instant Ocean and Sodium Bicarbonate</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:207px;">Pentylenetetrazol</td>
			<td style="width:91px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:111px;">P6500</td>
			<td style="width:132px;">Diluted to 300 mM in 1x phosphate buffered saline</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:207px;">Nanofil syringe</td>
			<td style="width:91px;">World Precision Instruments, Inc.</td>
			<td style="width:111px;">06A</td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:207px;">34 G Beveled needle</td>
			<td style="width:91px;">World Precision Instruments, Inc.</td>
			<td style="width:111px;">NF34BV</td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">Sponge</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;">Small pore and chemical-free</td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:207px;">Foam-backed fine sand paper</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;">5 x 5 cm2 is large enough</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:207px;">9 V Battery</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:207px;">Wires with alligator clips</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;">Need 2</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:207px;">37 cm x 42 cm Kimwipe</td>
			<td style="width:91px;">Kimberly-Clark Professional</td>
			<td style="width:111px;">TW31KEM</td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:207px;">11 cm x 21 cm Kimwipe</td>
			<td style="width:91px;">Kimberly-Clark Professional</td>
			<td style="width:111px;">TW31KWP</td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:207px;">1/8 in diameter tube</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:207px;">1 cm diameter tube</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:207px;">1 mm diameter tube</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">Reducing valve with female Luer lock cap and silicone ferrule</td>
			<td style="width:91px;">Qosina</td>
			<td style="width:111px;">51505</td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">Microscope (Leica MZ APO)</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;">Another microscope can be used</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:207px;">Vanna scissors</td>
			<td style="width:91px;">Roboz Surgical Instruments Co., Inc.</td>
			<td style="width:111px;">15018-10</td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:207px;">60 ml Luer lock syringe tubes</td>
			<td style="width:91px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:111px;">309653</td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">3-way Stopcocks with Luer connections</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">1-way Stopcock with Luer connection</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">Fisherbrand 100 mm x 15 mm Petri dish</td>
			<td style="width:91px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:111px;">NC9299146</td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">Fisherbrand 60 mm x 15 mm Petri dish</td>
			<td style="width:91px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:111px;">S67961</td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:207px;">4 in Borosilicate capillary tube</td>
			<td style="width:91px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:111px;">TW100F-4</td>
			<td style="width:132px;">Can contain a filament to aid in filling with solution</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:207px;">P-97 Flaming/Brown Micropipette Puller</td>
			<td style="width:91px;">Sutter Instrument Co.</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">Digidata 1440</td>
			<td style="width:91px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">Axon Aloclamp 900A</td>
			<td style="width:91px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">Axoclamp software</td>
			<td style="width:91px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">HS-9Ax 1U headstage</td>
			<td style="width:91px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">0.010 in Silver wire</td>
			<td style="width:91px;">A-M Systems, Inc.</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">Q-series electrode holder</td>
			<td style="width:91px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:111px;">QSW-A10P</td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:207px;">10 ml Luer lock syringe</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:207px;">1 mm x 15 in Tubing</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;">Connect Luer lock syringe to Q-series electrode holder</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:207px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:91px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;">Need 2</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:207px;">Microsoft-based PC</td>
			<td style="width:91px;">Dell</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:207px;">Faraday Cage</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:207px;">Air Table</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Dissecting Microscope</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electrophysiological recording in the brain of intact adult zebrafish

此前，在成年斑马鱼的电生理研究一直局限于切片制剂或以眼罩准备和electrorentinogram录音。本文介绍了如何在成年斑马鱼可以被固定，气管插管，并用于体内电生理实验，允许记录神经活动。成年的固定化，需要提供溶解氧的鳃代替口腔和鳃盖运动的机构。用我们的技术，将动物固定，灌注水栖息地满足这一要求。根据三卡因甲磺酸盐进行开颅手术（MS-222，三卡因）麻醉提供接入到大脑。主电极被定位在开颅窗口内记录细胞外脑部活动。通过使用多管灌注系统，多种药理化合物可以施用给成年鱼和任何改动的神经活动可以观察到。该方法不仅可用于观测到进行关于变化的神经活性，而且它也允许幼虫和成虫斑马鱼之间作出比较。这使研究人员能够识别在神经活动的变化，由于在不同的人生阶段引入各种化合物的能力。

此协议已被用于测量体内成年斑马鱼的神经活动。这些电生理记录一致地和可重复性地获得的。 图5示出的成年斑马鱼的神经活性的天然的和诱导的变化有代表性的例子，当戊四氮（PTZ），公共chemoconvulsant 6,7,25,26，在插管被引入设置。 成年斑马鱼的天然神经活动的每个实验（ 图5A）进行了监测。但一直在观察到这种行为是自发的，小?...

Watch this Scientific Journal Video about Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish at JoVE.com

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

本文介绍了如何在成年斑马鱼可以被固定，气管插管，并用于体内电生理实验，让录音和操作在一个完整的动物的神经活动。

在完整的成年斑马鱼大脑电生理记录

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

electrophysiological-recording-in-the-brain-of-intact-adult-zebrafish

Research

JoVE Journal

Neuroscience

21.3K 次观看.  University of Georgia. 本文介绍了如何在成年斑马鱼可以被固定，气管插管，并用于体内电生理实验，让录音和操作在一个完整的动物的神经活动。 