慢性假单位病伤口感染的延迟接种模型

该协议是重要的，因为它描述了慢性伪多尼亚伤口感染的模型，而无需异物植入或免疫抑制。延迟接种与伪莫纳斯aeruginosa24小时后，全厚度切除伤口，使细菌的快速清除和传播，建立感染，持续7至10天。这个独特的模型将是一个有用的工具，研究细菌发病机制，宿主病原体相互作用，并开发新的疗法，慢性伪多多纳斯亚鲁吉诺萨伤口感染。

协助我演示手术的将是来自博利基实验室的医科学生刘丹。在开始手术之前，称一只麻醉的 8 到 12 周大的小鼠，以获得基线重量，并将鼠标放在易发位置。在确认对踏板反射缺乏反应后，皮下将鼠标注射250微升预加热无菌0.9%氯化钠。

使用电动剃须刀从鼠标的后侧区域去除头发，并在暴露的皮肤上涂抹一层薄薄的脱毛霜。20 至 60 秒后，用湿在温水中化妆水湿的纱布去除头发和多余的头发。对于全厚度切除伤口手术，首先使用25表针皮下注射0.6至1毫克每公斤持续释放丁丙诺啡在小鼠的中端区域，并用三个替代无菌Betadine和酒精拭子以圆形方式擦拭手术部位。

在手术现场放置一个塑料粘附包装，然后绷紧地伸展皮肤。当皮肤干燥后，使用无菌的六毫米直径皮肤活检冲孔通过左后皮表皮进行初始切口，然后在右侧后皮表皮上进行第二个切口。使用钳子从左侧轮廓伤口区域的中心对皮肤进行帐篷，并使用剪刀切除表皮和皮肤层。

重复右轮廓伤口区域的切口以产生对称切除伤口后，用 50 微升无菌盐水洗涤两个伤口。当手术场址和周围皮肤干燥后，用透明薄膜敷料覆盖伤口和伤口，将鼠标放在加热垫上的清洁笼中，并监测直至完全卧发。手术后24小时，再次称重再麻醉小鼠，并在两侧注射250微升预加热无菌氯化钠。

接下来，将100微升的发光P.aeruginosa应变悬浮液装入装有27表针的500微升结核菌安全帽注射器中，并通过透明薄膜敷料将40微升的细菌悬浮液注入每个伤口。确保细菌悬浮液混合良好，透明敷料完好无损。确保只需将针头挡板侧向上刺穿一次透明敷料。

然后将鼠标返回到加热页面上的笼子，并监控并提供夹在笼子地板上的食物颗粒之间的高热量营养补充剂糊。将剩余的菌分板放在LB加糖板上，并计算菌落，以确认被施用的细菌数量。对于受感染伤口的体内成像，遵循生物安全二级密封协议，将小鼠运送到和从成像仪器运送，并将麻醉小鼠放在成像室内的易发位置。

在成像软件中，将曝光时间、装箱、停止和视场设置为适合实验。接下来，在伤口位点创建一个感兴趣的区域，并测量光子/秒中检测到的平均通量。要测量背景，请通过成像平台上的随机区域创建感兴趣的区域，并减去每秒钟光子的背景数。

实验结束时，在生物安全柜中，使用无菌剪刀和钳子切除伤口床，将每张床放在一毫升无菌PBS中，放在1.5毫升聚丙烯管中。用剪刀将伤口组织切碎，并在4摄氏度的摇床上孵化组织碎片，每分钟旋转300次，两小时。在孵化结束时，每个管旋转10秒，然后连续稀释PBS中的细菌废水，将稀释的细菌污水电镀到LB agar上，以量化细菌负担。

利用成像光学系统获得的这一代表性图像表明，该模型可产生可检测的发光。在这个实验中，感染在接种后第三天达到顶峰，并且根据生物发光和菌群计数持续接种后七天。从伤口分离出的细菌的培养进一步证明，每个伤口的量化菌落形成单位与检测到的发光相关。

虽然注射后立即有一个初始的快速减肥，盐水注射和补充营养可以恢复小鼠的初始重量。计算的接种剂量，其中50%的伤口将变得实质感染已确定为约7.7倍10的第二菌落形成单位每毫升。剂量高于1倍10至第四菌落形成单位每毫升导致100%感染率。

各种局部和全身治疗可以应用后，伤害和接种程序，以研究新的潜在疗法伪多莫纳斯阿鲁吉诺萨。所有与伪多莫纳斯aeruginosa和受感染的小鼠的工作，应按照研究人员的机构生物安全和动物使用委员会指南，使用BSL-2安全预防措施进行。