这种方法可以帮助回答有关产生血管化脚手架的关键问题,而血管化脚手架是组织工程领域的圣杯。这项技术的主要优点是,倒置方向的加压袋可改善不可移植人体器官的去细胞化,并使我们能够在适当的时间范围内以无菌的方式做到这一点。要让心脏做好去细胞化的准备,请首先对可能的缺陷进行内部检查。
如果存在隔膜缺陷,请用适当的缝合线纠正缺陷。接下来,用2-0的丝绸缝合来将上等的维纳卡瓦斯拉下马。用 5-0 PROLENE 缝合右中庭壁,并解剖远离主肺动脉的主动脉,以便随后进行管状。
根据容器的直径将连接器插入主动脉和肺动脉,用 2-0 丝线固定连接器。使用其中一个肺静脉孔,通过左中庭向左心室插入一条输油管管线,并将输液管线连接到主动脉中的连接器,将流出线连接到肺动脉中的连接器。将准备好的心脏放入倒置方向的聚酯袋中,然后将袋放入灌注容器中。
根据容器的直径,将每条管路连接到橡胶塞子中各端口,并将塞子插入灌注容器的盖子中,以密封聚酯袋。然后,通过橡胶塞的输液口对PBS进行灌注,以验证从肺动脉和插入左心室的管路流出,利用水流清除血管内任何残留的血液痕迹。心脏准备就绪后,将组装的生物反应器垂直放置,将输液管路、压力头线、肺动脉流出线和生物反应器排空管线连接到灌注生物反应器顶部的橡胶盖表面端口。
然后,用超音速溶液去细胞心脏四小时,用低度溶液解2小时,用硫酸钠(SDS)120小时,最后用120升PBS洗涤,所有洗涤量都在音管根部测得的恒定120毫米汞压下。在PBS洗涤的最后10升中,加入500毫升无菌2.1%的过乙酸溶液,用10种正常氢氧化钠中和到灌注溶液中,对脚手架进行消毒。通常,在去细胞化过程中进入大母的流速会随着灌注溶液从超音速到低吨位的变化而逐渐减少。
相比之下,当灌注溶液从低度溶液更改为 SDS 时,流速增加,此时输液流速表现出波动。肺动脉的流出率与高、低氧溶液呈类似趋势。然而,SDS灌注期间的流出率总体下降。
冠状动脉灌注效率也随着时间的推移而降低,因为不同的试剂通过血管注入。由于肺动脉和左心室的外流呼吸器同时收集,可以通过光谱分析比较其碎片含量。在灌注期间,两个血管的污水的浊度会随着时间的推移而减小,尽管肺动脉的浊度与最初灌注期间从左心室观察到的颜色变化相比,呈现出更突然的颜色变化。
通过六颗脱细胞人类心脏的双子酸蛋白测定,对流出浊度与细胞碎片之间的相关性进行评估,揭示了蛋白质浓度与流出浊度之间的线性相关性。在尝试此过程时,必须监控流速并定期收集灌注,以实际监控灌注过程。按照这个程序,其他技术,如机械评估或无菌测试可用于评估脚手架的保真度及其潜在的用途,重新细胞生成功能性心脏组织。
该技术开发后,为再生医学和组织工程领域的研究人员探索整个血管化器官的生成铺平了道路,真正改变了实体器官移植领域。不要忘记,使用人体器官和组织以及 SDS 等化学品可能极其危险,在进行此程序时,始终佩戴适当的个人防护设备。