שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח על יצירת פיגומים vascularized, שהם באמת הגביע הקדוש של השדה הנדסת רקמות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי כיס בלחץ בכיוון הפוך משפר את decellularization של איברים אנושיים שאינם להשתלה ומאפשר לנו לעשות את זה בצורה סטרילית על פני מסגרת זמן מתאימה. כדי להכין את הלב לדפלולריזציה, תחילה לבצע בדיקה פנימית עבור פגמים אפשריים.
אם קיים פגם מחיצה, לתקן את הפגם עם התפרים המתאימים. לאחר מכן, ligate ואנה קאבס מעולה ונון נחות עם 2-0 תפר משי. תפרו את קיר ה אטריום הימני עם 5-0 פרולין, ו לנתח את אבי העורקים הרחק עורק הריאה הראשי עבור cannulation הבאים.
הכנס את המחברים, בהתאם לקוטר הכלי, לתוך העורקים העורקים ועורק הריאה, ואבטח את המחברים בתפרים משי 2-0. באמצעות אחד פתחי וריד הריאה, הכנס קו צינורות דרך ה אטריום השמאלי לכיוון החדר השמאלי, וחבר קו עירוי למחבר ב- aorta וקו זרימה למחבר ב עורק הריאה. מניחים את הלב המוכן לתוך כיס פוליאסטר בכיוון ההפוך, ומ מניחים את השקית לתוך מיכל נזיבה.
חבר כל אחד מהקווים ליציאות המתאימות ב פקק הגומי, בהתאם לקוטר המיכל, והכנס את הפקק למכסה של מיכל הנזיפה כדי לאטום את כיס הפוליאסטר. לאחר מכן, לעיין PBS דרך יציאת עירוי של פקק הגומי כדי לאמת את הזרימה מן העורק ריאתי מן הקו מוכנס לתוך החדר השמאלי, באמצעות זרימה זו כדי לנקות את האיבר של כל עקבות שיורית של דם בתוך כלי הדם. כאשר הלב מוכן, מניחים את הביוריאקטור שהורכב בכיוון זקוף, וחברו את קו העירוי, קו ראש הלחץ, קו זרימת עורקים ריאתי וקו ניקוז ביו-ריאקטור ליציאות פני השטח של מכסה הגומי על גבי הביוריאקטור של הזלוש.
לאחר מכן, decellularize הלב במשך ארבע שעות עם פתרון היפרטוני, שעתיים עם פתרון היפוטוני, 120 שעות עם נתרן dodecyl סולפט, או SDS, ו לשטוף סופית עם 120 ליטר של PBS, כל תחת קבוע 120 מילימטרים של לחץ כספית כפי שנמדד בשורש האורטי. במהלך 10 ליטר האחרון של לשטוף PBS, להוסיף 500 מיליליטר של 2.1% חומצה סטרילית פתרון חומצה peracetic מנוטרל עם 10 הידרוקסיד נתרן נורמלי לתופס זלוס כדי לעקר את הפיגום. בדרך כלל, קצב הזרימה לתוך בית הדם במהלך תהליך דקלולריזציה בהדרגה פוחתת כמו פתרון זלוח משתנה היפרטוני היפוטוני.
לעומת זאת, קצב הזרימה עולה כאשר פתרון התדלוק משתנה מפתרון היפוטוני ל- SDS, ובנקודה זו קצב זרימת העירוי מדגים תנודות. קצב הזרימה של עורק הריאה מדגים מגמה דומה עם הפתרונות ההיפר-היפוטוניים. עם זאת, קצב הזרימה במהלך זלוש SDS מציג ירידה כוללת.
יעילות חליטה כלילת גם פוחתת עם הזמן כמו reagents שונים הם חדור דרך כלי הדם. כאשר הזרימה מתפרפרת מ עורק הריאה והחנדר השמאלי נאספים בו זמנית, ניתן להשוות את תוכן הפסולת שלהם על ידי ספקטרוסקופיה. העיסתנות של הפלחיה משני כלי השיט פוחתת עם הזמן במהלך הזלוף, אם כי העכור בעורק הריאה מציג שינוי צבע פתאומי יותר בהשוואה לזה שנצפה בחדר השמאלי במהלך תקופת הזלוף הראשונית.
הערכת המתאם בין עששת הזרימה לבין פסולת התאים על ידי אסאי חלבון חומצה ביצינצ'ונית משישה לבבות אנושיים דפלולריים מגלה מתאם ליניארי בין ריכוז החלבון לבין חרפת הרוחות. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לפקח על קצב הזרימה ולאסוף את ההתעלות מעת לעת כדי לפקח בפועל על תהליך התדלוק. בעקבות הליך זה, טכניקות אחרות כמו הערכה מכנית או בדיקות סטריליות ניתן להשתמש כדי להעריך את הנאמנות של הפיגום ואת השימוש הפוטנציאלי שלה recellularization כדי ליצור רקמת לב תפקודית.
לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הרפואה הרגנרטיבית והנדסת רקמות לחקור את הדור של איברים שלמים של כלי דם, ממש לשנות את תחום השתלת איברים מוצק. אל תשכח כי עבודה עם איברים אנושיים ורקמות וכימיקלים כגון SDS יכול להיות מסוכן מאוד, תמיד ללבוש ציוד הגנה אישי המתאים בעת ביצוע הליך זה.
