这种方法可以帮助回答肺研究领域的一些关键问题,例如与急性和慢性晚期肺病的治疗相关的问题。该技术的主要优点是,它有利于在长期体外膜氧合期间启动多器官损伤的分子和病理机制,作为一种拯救生命的过程。在清洁、非无菌条件下,使用手术刀片和解剖显微镜将三个芬斯特引入两个法国聚氨酯导管的远点三分之一,其放大倍率为 16 倍。
接下来,将流出的管罐放入注油溶液中,打开近源泵以填充体外膜氧合(ECMO)机,以每分钟一毫米的流量对电路进行注油。30分钟后,向氧机添加每分钟0.5升100%氧气,并确认麻醉成年小鼠对手趾捏缺乏反应。在动物的眼睛上涂下软膏后,在颈部左侧做一个四毫米的侧皮切口,以可视化壶静脉,并使用微钳子和棉签进一步暴露血管。
使用 8-0丝缝合,以打上暴露静脉的端端,并在近端放置一个滑结。用微切口将静脉前壁插入,通过26量球的麸皮将每克肝素2.5个国际单位注射到血管静脉中,将手术垫的头部端提高30度,以避免在插入过程中过度失血。小心地将两根法国聚氨酯管插入壶静脉的近端,稍微旋转管,同时将管杆推到四厘米深,以达到劣质维纳卡瓦的腹腔分叉。
轻轻推管很重要,但连续不使用额外的力。如果遇到阻力,将管拉回并再次插入。用 8 - 0 固定管丝结,并暴露正确的壶静脉,刚刚证明。
用一个法国聚氨酯管,将右壶静脉,轻轻地将管状动脉向右中庭移动五毫米,并用 8-0 固定管状丝绸结。用另一个法国聚氨酯导管将左股动脉连接起来,用于侵入性压力监测和血气分析,并将连接到数据采集装置的心电图针头插入两个前肢和左胸壁。然后插入连接到数据采集设备的直肠温度计。
要启动静脉体外膜氧合,请将泵打开,初始流量为每分钟 0.1 毫升。两分钟后,将流量调整为每分钟三到五毫升。在稳定流量下,通过数据采集设备实时监控关键参数,持续检查静脉排水的回流,监测空气陷阱储液罐中的血液水平。
使用装有 24 量表的麸皮的一毫升注射器收集任何血液泄漏,然后通过空气陷印储液罐将血液返回到 ECMO 回路。对于血气分析,在ECMO启动后10分钟,使用血液采样盒从氧气器前、氧气器后和股动脉采集约75微升动脉血液。ECMO启动后30分钟和60分钟,仅从股动脉采集血液。
启动后 45 分钟和 90 分钟,施用 0.1 毫升的注油溶液,以补偿通过空气疏水器的内脏液体损失。启动两小时后,从氧气器、劣质静脉和股动脉中采集血液。上次血液采集后,在五分钟内降低泵的流量,从而停止 ECMO,同时继续记录重要参数 10 分钟。
在一个典型的实验中,动物的生理参数每10分钟记录一次。在这个具有代表性的实验中,血液学参数表明在ECMO期间有相关的血液调节,尽管不需要输血来补偿中度贫血。氧合参数在氧空气混合物中以 1.0 的受启发氧气的一小部分显示适当的氧机性能。
此外,ECMO期间的代谢变化包括实验开始时和实验结束时的呼吸碱化。没有进行额外的血液缓冲。使用适当的造血技术吸收通过ECMO回路的血液流动,通过血气分析监测氧合参数,用额外的注血溶液取代血液采样造成的任何失血,这一点很重要。
这项技术为肺病领域的研究人员铺平了道路,通过使用80多个可用的仿敲鼠标模型,显著改善了挽救生命的治疗方案。