この方法は、急性および慢性末期肺疾患の治療に関連するものなど、肺研究の分野における重要な質問に答える助けとなる。この技術の主な利点は、救命処置として体外膜酸素化の長期化中に多臓器損傷の分子および病理学的メカニズムの開始を容易にすることです。清潔で非無菌の条件下では、外科用ブレードと解剖顕微鏡を使用して、16倍の倍率の下で2つのフランスのポリウレタンカテーテルの遠位3分の1に3つのフェネレーションを導入します。
次に、流出カニューレをプライミング液中に入れ、蠕動ポンプをオンにして体外膜酸素化、またはECMOマシンを充填し、毎分1ミリメートルの流量で回路をプライミングします。30分後、酸素供給器に1分あたり0.5リットルの酸素を加え、麻酔をした大人のマウスのつまみつまみへの応答の欠如を確認します。動物の目に軟膏を塗布した後、頸部の左側に4ミリメートルの横側面皮膚切開を行い、頸静脈を可視化し、マイクロ鉗子と綿棒を使用して容器をさらに露出させます。
8-0 を使用するシルク縫合糸は、露出した静脈の遠位端をリゲートし、近位端にスリップノットを配置します。静脈の前壁をマイクロシザーで切開し、26ゲージブラキュラを介してヘパリン1グラム当たり2.5国際単位を頸静脈に注入し、挿入中の過度の失血を避けるために外科パッドのヘッドエンドを30度上げる。慎重に下の静脈のイリアック分岐に到達するためにカニューレを4センチメートルの深さまで押しながら、頸静脈の近位端にフェネレートされた2つのフランスのポリウレタンカニューレを挿入します。
カニューレを非常に穏やかに押し上げるのは重要ですが、余分な力を使わずに継続的に行うことが重要です。抵抗が発生した場合は、カニューレを後ろに引いて、もう一度挿入します。8-0でカニューレを固定シルクノット、そしてちょうど示したように右頸静脈を露出させる。
右頸静脈をフランスのポリウレタンカニューレ1つでカニューレ化し、カニューレを5ミリメートル右心房に向かってそっと動かし、8-0でカニューレを固定します。シルクノット。左大腿動脈を別のフランスのポリウレタンカニューレでカテーテルして侵襲的な圧力モニタリングと血液ガス分析を行い、データ取得装置に接続された心電図針を両方の前肢と左胸壁に挿入する。次に、データ取得装置に接続された直腸温度計を挿入します。
静脈外膜酸素化を開始するには、ポンプを毎分0.1ミリリットルの初期流量に変えます。2分後、流量を毎分3~5ミリリットルに調整します。安定した流れの下で、リアルタイムモードのデータ取得装置を介して重要なパラメータを監視し、静脈排水からの背流れを継続的にチェックし、空気トラッパー貯留所の血液のレベルを監視する。
24ゲージのブラキュラを装着した1ミリリットルのシリンジを使用して血液漏れを収集し、空気トラップリザーバを介してECMO回路に血液を返します。血液ガス分析のために、ECMO開始後10分、血液サンプリングカートリッジを使用して、酸素供給器の前、酸素供給器の直後、および大腿動脈から約75マイクロリットルの動脈血を採取する。ECMO開始後30分と60分、大腿動脈からのみ血液を採取する。
開始後45分および90分後、プライミング溶液の0.1ミリリットルを投与し、空気トラッパーを介して通して通気液損失を補償する。開始の2時間後、酸素供給器、下の大静脈、および大腿動脈から血液を採取する。最後の採血後、ポンプの流量を5分間で減らし、ECMOを停止させ、さらに10分間重要なパラメータを記録し続けます。
典型的な実験では、動物の生理学的パラメータは10分ごとに記録される。この代表的な実験では、血液学的パラメータは、中程度の貧血を補うために輸血は必要なかったが、ECMO中に関連する血液透析を実証した。酸素化パラメータは、1.0の触発された酸素の一部で酸素の混合物で適切な酸素供給器の性能を示した。
さらに、ECMO中の代謝変化には、実験の開始時および終了時に呼吸性アルカローシスが含まれていた。余分な血液緩衝は行われなかった。ECMO回路を介して血液の流れを吸収し、血液ガス分析を介して酸素化パラメータを監視し、血液サンプリングによって引き起こされる失血を余分なプライミング溶液に置き換えるために適切なカヌレーション技術を使用することが重要です。
この技術は、80以上の利用可能なノックイン、ノックアウトマウスモデルを使用して、肺疾患の分野の研究者が救命処置のためのプロトコルを大幅に改善する道を開きます。
