此方法有助于回答有关在小鼠中诱导和评估镜头引起的近视的关键问题。如如何稳定镜片。该技术的主要阶段是,所有步骤都经过优化和标准化,允许跨实验室获得精确、可重复和可比较的结果。
一般来说,新采用这种方法的人很挣扎,因为很难在没有任何练习的情况下将眼镜粘在鼠标头上。对于每只鼠标,请准备以下内容。一个头戴尼龙棒。
一个更高,一个较低的钛框架。根据实验的目的,两个具有适当权力的透镜。一个 10mm 长度的 M1.4 尺寸螺钉。
一个螺母用于 M1.4 尺寸螺钉。1 个普通垫圈,用于 0.3 毫米厚的 M1.4 尺寸螺钉。还有两个人工指甲尖
要组装右眼镜框架,请安排指甲尖朝向外部方向,以达到最佳的保护效果。并且,将指甲尖和框架之间的角度调整到 130 度左右,以避免遮挡鼠标视觉场。使用氰丙烯酸酯胶粘剂,将人工指甲尖端粘附在框架上,使粘合剂在12小时内完全干燥。
使用指甲钳将完全粘附的指甲尖修剪成一个又一厘米的形状,然后将镜头放在镜框上。从镜头边缘注入氰丙烯酸酯粘合剂,让粘合剂通过表面张力扩散。当粘合剂干燥时,将螺钉与斗杆的平侧垫圈一起拧入尼龙棒中。
然后以相同的方式准备左框架,指尖与右框架尖端相反的方向倾斜。对于轴向长度的折射基线测量,应用一滴霉菌剂,每毫升热带胺含有5毫克,眼球每毫升苯甲酸苯胺含有5毫克,以扩张瞳孔。在全身麻醉前等待至少五分钟,并调整红外照片折射器取景器内一只眼睛的方向,将第一个 Purkinje 图像定位在瞳孔中心,并测量沿光轴的折射。
以相同方式测量另一只眼睛后,将鼠标放在光谱域光学相干断层扫描系统中,将轴向长度定义为从角膜涡流到光学神经附近最亮边界的距离。要将先前准备好的护目镜框架固定到鼠标上,首先将一滴 0.1% 纯化的催眠钠眼滴涂抹在每只眼睛上,然后将麻醉小鼠的下巴放在倾斜表面上,使颅骨的前平面水平。使用用70%乙醇浸泡的棉签对头发和头皮进行消毒,在耳朵和眼睛之间,在皮肤、耳朵和眼睛之间做一个0.8平方厘米的切口,露出头骨。
使用棉签中的牙科蚀刻液去除腹膜,并使用一对没有镜片的镜框帮助将斗杆固定到正确的位置,仔细调整镜框的位置,以确保两只眼睛都处于空框的中间。使用自护理牙科粘合系统将斗杆连接到鼠标头上,等待约五分钟,然后小心地拆下框架和螺母,而不改变斗杆的位置。然后注射0.75毫克每公斤盐酸阿蒂帕马佐勒内酮,以帮助小鼠更快地从麻醉中恢复,并放入单个笼子,直到完全恢复。
手术后24小时,抓住棍子,将带镜片的镜框放在动物身上,以启动近视感应。然后在老鼠和笼底之间放置一个网,过滤食物残片,每天监测体重和毛行为,在整个实验过程中将短视小鼠与相同年龄、未受感染的小鼠进行比较。取下镜框,每周至少用棉签清洁镜片和指甲尖,以保持镜片的透明度。
在这里,显示一套已完成的眼镜。两帧之间的角度可以调整,以适应不同年龄的小鼠。将眼镜放在框架上后,两块眼镜应该相当对称。
对于这种由负 30 二视镜诱导的鼠标眼的折射测量,从产后第 21 天开始,在 x 轴和 y 轴上对目光进行接近零度的控制,表明鼠标在相机前看到。这整个眼睛图像,由光谱域光学相干断层扫描系统拍摄,为小鼠调整,允许对眼睛的每个部分进行定义。在这个具有代表性的实验中,负30屈光透镜在折射和轴向长度测量中诱导了强烈的近视变化,而零屈光透镜则产生了强烈的近视变化。
折射变化在第一周达到顶峰,并停留在平坦的两个星期,而近视眼与控制眼轴向长度的变化差异在第一周显著,并越来越大,并逐渐在后两周。在尝试该过程时,必须记住密切遵循测量折射和轴向透镜的说明,以便使结果在实验实验室中具有可比性。该技术开发后,为近视领域的研究人员探索普通小鼠的致病机制铺平了道路,不仅包括转基因小鼠。