Questo metodo può aiutare a rispondere alle domande chiave sull'induzione e la valutazione della miopia indotta dalle lenti nei topi. Come come stabilizzare le lenti. La fase principale numero uno di questa tecnica è che tutti i passaggi sono stati ottimizzati e standardizzati consentendo l'acquisizione di risultati precisi, riproducibili e comparabili tra i laboratori.
Generalmente, le persone nuove a questo metodo sono difficili poiché è molto difficile incollare gli occhiali sulle teste del mouse in modo stabile senza alcuna pratica. Per ogni mouse, preparare quanto segue. Un bastoncino di nylon montato sulla testa.
Un telaio in titanio più alto e uno inferiore. Due lenti con i poteri appropriati secondo lo scopo dell'esperimento. Una vite di dimensioni M1.4 di lunghezza 10 mm.
Un dado per la vite di dimensioni M1.4. 1 rondella semplice per la vite di dimensioni M1.4 spessa 0,3 millimetri. E due punte artificiali dell'unghia.
Per assemblare il telaio degli occhiali giusti, disporre una punta dell'unghia per affrontare la direzione esterna per ottenere il miglior effetto protettivo. Quindi, regola l'angolo tra la punta dell'unghia e il telaio a circa 130 gradi per evitare di mascherare il campo della vista del mouse. Utilizzando l'adesivo cianoacrilato, aderire alla punta artificiale dell'unghia al telaio e lasciare asciugare completamente l'adesivo per 12 ore.
Utilizzare i tagliaunghie per tagliare la punta dell'unghia completamente aderendo a circa una forma di uno per un centimetro e posizionare l'obiettivo sul telaio. Iniettare l'adesivo cianoacrilato dal bordo dell'obiettivo e lasciare che l'adesivo si diffonda dalla tensione superficiale. Quando l'adesivo è asciutto, stringere la vite nel bastone di nylon insieme alla lavatrice dal lato piatto del bastone.
Quindi preparare il telaio sinistro nello stesso modo con la punta delle dita angolata nella direzione opposta della punta del telaio destro. Per la misurazione basale della rifrazione nella lunghezza assiale, applicare una goccia di agente midritico, contenente cinque milligrammi per millilitro tropicamide e cinque milligrammi per millilitro fenilefrina cloridrato su ciascun lato del bulbo oculare per dilatare la pupilla. Attendere almeno cinque minuti prima dell'anestesia generale e regolare la direzione di uno degli occhi all'interno del mirino di un rifrattore fotografico a infrarossi per posizionare la prima immagine purkinje al centro della pupilla e misurare la rifrazione lungo l'asse ottico.
Dopo aver misurato l'altro occhio nello stesso modo, posizionare il mouse nel sistema di tomografia a coerenza ottica del dominio spettrale e definire la lunghezza assiale come la distanza dal vortice corneale al limite più luminoso vicino al nervo ottico. Per fissare il telaio della maschera precedentemente preparato sul mouse, applicare prima una goccia di goccia di ialuronato di sodio purificato allo 0,1% su ogni occhio e posizionare il mento del mouse anestetizzato su una superficie inclinata in modo che il piano iniziale del cranio sia orizzontale. Utilizzare un batuffolo di cotone imbevuto di 70%etanolo per sterilizzare i capelli e il cuoio capelluto, tra le orecchie e gli occhi, e fare un'incisione di 0,8 cm quadrati nella pelle, tra le orecchie e gli occhi, per esporre il cranio.
Utilizzare il liquido di incisione dentale in un batuffolo di cotone per rimuovere il periostio e utilizzare un paio di montature senza lenti per aiutare a fissare il bastone nella posizione giusta, regolando attentamente la posizione dei telai per assicurarsi che entrambi gli occhi si trovano al centro delle cornici vuote. Utilizzare un sistema adesivo dentale auto-cura per attaccare il bastone sulla testa del mouse e attendere circa cinque minuti prima di rimuovere attentamente il telaio e il dado senza cambiare la posizione del bastone. Quindi iniettare 0,75 milligrammi per chilogrammo di atipamazolo cloridrato per via intraperitoneale per aiutare il topo a riprendersi dall'anestesia più rapidamente e posizionare il mouse in una gabbia individuale fino a completo recupero.
24 ore dopo l'intervento chirurgico, afferrare il bastone e posizionare le montature con lenti sull'animale per avviare l'induzione della miopia. Quindi posizionare una rete tra il topo e il fondo della gabbia per filtrare gli scarti alimentari e monitorare quotidianamente il peso corporeo e il comportamento lordo, confrontando i topi miopi con gli stessi topi invecchiati e incontaminati durante l'intero processo sperimentale. Rimuovere il telaio e pulire le lenti e la punta dell'unghia con tamponi di cotone almeno due volte a settimana per mantenere la trasparenza delle lenti.
Qui viene mostrato un set di occhiali completati. L'angolo tra i due fotogrammi può essere regolato per adattarsi a topi di età diverse. Dopo aver posizionato gli occhiali sul telaio come dimostrato, i due pezzi di occhiali dovrebbero essere abbastanza simmetrici.
Per questa misurazione della rifrazione in un occhio di topo indotta da un obiettivo a 30 diottrie negative per tre settimane, a partire dal giorno post-natale 21, lo sguardo è stato controllato vicino a zero gradi sia nell'asse x che in quello y, indicando che il mouse stava vedendo proprio di fronte alla fotocamera. Tutta questa immagine oculare, scattata da un sistema di tomografia a coerenza ottica a dominio spettrale, sintonizzata per i topi, consente di definire ogni parte dell'occhio. In questo esperimento rappresentativo, le lenti a 30 diottrie negative hanno indotto un forte spostamento miopico sia nelle misure di rifrazione che di lunghezza assiale, rispetto alle lenti a diottrie zero.
Il cambiamento nella rifrazione raggiunse il picco nella prima settimana e rimase piatto per le due settimane successive, mentre la differenza tra il cambiamento dell'occhio miope e le lunghezze assiali degli occhi di controllo fu significativa dalla prima settimana e divenne sempre più grande nelle due settimane successive. Durante il tentativo della procedura, è importante ricordare di seguire da vicino le istruzioni per misurare la rifrazione e la lente assiale, per consentire al risultato di essere comparabile tra i laboratori sperimentali. Dopo il suo sviluppo la tecnica apre la strada ai ricercatori nel campo della miopia per esplorare il meccanismo patogeno in, non solo topi ordinari, ma anche topi geneticamente modificati.
