この方法は、マウスにおけるレンズ誘発近視の誘導と評価に関する重要な質問に答えるのに役立ちます。レンズの安定化方法など。この手法の主な第 1 段階は、すべてのステップが最適化され、標準化されており、ラボ全体で正確で再現可能で同等の結果を得られるということです。
一般的に、この方法に新しい人は、何の練習もなくマウスの頭に眼鏡を安定して接着することは非常に困難であるため、苦労しています。マウスごとに、以下の準備を行います。ヘッドマウントナイロンスティック1個。
1つの高い、1つの下のチタニウムフレーム。実験の目的に応じて適切な力を持つ2つのレンズ。10mm長M1.4サイズのネジ。
M1.4サイズのネジ用のナット1本。厚さ0.3ミリメートルのM1.4サイズのネジ用の1プレーンワッシャー。そして、2つの人工指の爪のヒント。
右の眼鏡フレームを組み立てるには、最良の保護効果を達成するために外側の方向に向かって指の爪の先端を配置します。また、マウスビジョンフィールドをマスクしないように、爪の先端とフレームの間の角度を約130度に調整します。シアノアクリル酸接着剤を使用して、人工指の爪の先端をフレームに接着し、接着剤を12時間完全に乾燥させます。
爪切りを使用して、完全に付着した爪の先端を約1センチメートルの形状にトリミングし、レンズをフレームに配置します。水晶体の端からシアノクリレート接着剤を注入し、表面張力によって広がらせます。接着剤が乾いたら、ネジをスティックの平らな側からワッシャーと一緒にナイロンスティックに締めます。
次に、右フレーム先端の反対方向に角度を付けて指先を使用して、同じ方法で左枠を準備します。軸方向の長さの屈折のベースライン測定のために、ミリリットルトロピックアミドあたり5ミリグラム、眼球の両側に5ミリグラムのフェニレフリン塩酸塩を含む無量の薬剤を1滴塗布して瞳孔を拡張する。全身麻酔の前に少なくとも5分間待ち、赤外写真屈折器のファインダー内の目の方向を調整して、最初のPurkinje画像を瞳孔の中央に配置し、光軸に沿って屈折を測定します。
同じように他の目を測定した後、スペクトル領域の光学コヒーレンス断層撮影システムにマウスを置き、角膜渦から光神経近くの最も明るい境界までの距離として軸方向の長さを定義します。以前に準備したゴーグルフレームをマウスに固定するには、まず0.1%精製したヒアルロン酸ナトリウムアイドロップを各目に1滴塗布し、麻酔をかけたマウスの顎を傾斜した表面に置き、頭蓋骨の前頭面が水平になるようにします。70%エタノールを浸した綿棒を使用して、耳と目の間の髪と頭皮を殺菌し、耳と目の間の皮膚に0.8平方cmの切開を行い、頭蓋骨を露出させます。
綿棒の歯科エッチング液を使用して骨膜を取り除き、レンズのないフレームのペアを使用してスティックを正しい位置に固定し、フレームの位置を慎重に調整して両方の目が空のフレームの真ん中に入っていることを確認します。セルフケア歯科用接着剤システムを使用して、マウスヘッドにスティックを取り付け、約5分間待ってから、スティックの位置を変更することなく、フレームとナットを慎重に取り外します。その後、腹腔内で1キログラム当たり0.75ミリグラムのアトパマゾール塩酸塩を注入し、マウスが麻酔からより迅速に回復し、完全に回復するまでマウスを個々のケージに入れます。
手術の24時間後、スティックをつかみ、レンズ付きのフレームを動物の上に置いて近視誘導を開始します。次に、マウスとケージ底の間にネットを置いて食品スクラップをフィルタリングし、体重と総挙動を毎日監視し、実験プロセス全体で同じ老化した手つかずのマウスと近視マウスを比較します。フレームを取り外し、レンズの透明度を維持するために、少なくとも週に2回は綿棒でレンズと爪の先端をきれいにします。
ここでは、完成した眼鏡のセットが示されています。2つのフレーム間の角度は、異なる年齢のマウスに合わせて調整することができます。示されているように、眼鏡をフレームに配置した後、眼鏡の2つの部分はかなり対称でなければなりません。
この負の30のディオプトレレンズによって3週間誘導されたマウスの眼での屈折測定のために、出生後21日目から、視線はx軸とy軸の両方でゼロ度近くに制御され、マウスがカメラの正面に見えていたことを示す。この全体の眼画像は、スペクトル領域光コヘレンス断層撮影システムによって撮影され、マウス用に調整され、眼の各部分を定義することを可能にする。この代表的な実験では、負の30のディオプトレレンズは、ゼロ・ディオプトレ・レンズと比較して、屈折および軸長の測定の両方において強い近視シフトを誘発した。
屈折の変化は最初の週にピークに達し、次の2週間は横ばいでしたが、近視眼の変化とコントロールアイ軸の長さの差は最初の週から有意であり、次の2週間で大きくなりました。手順を試みる間、実験ラボ全体で結果を比較できるように、屈折と軸レンズを測定するための指示に密接に従うことを忘れないでください。その開発後、近視の分野の研究者が、普通のマウスだけでなく、遺伝子組み換えマウスの病原性メカニズムを探求する道を開きます。
