Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы о индуцировании и оценке линз индуцированной близорукости у мышей. Например, как стабилизировать линзы. Основной этап этого метода номер один заключается в том, что все этапы были оптимизированы и стандартизированы, что позволяет получения точных, воспроизводимых и сопоставимых результатов в разных лабораториях.
Как правило, люди, новые для этого метода является борьба, поскольку это очень трудно склеить очки на головы мыши ножом без какой-либо практики. Для каждой мыши подготовьтесь к следующему. Одна голова установлена нейлоновая палочка.
Один выше и один нижний титановый каркас. Два объектива с соответствующими полномочиями в соответствии с целью эксперимента. Один винт длиной 10 мм M1.4.
Один гайка для винта размера M1.4. 1 простая шайба для винта M1.4 толщиной 0,3 миллиметра. И два искусственных кончика ногтей.
Чтобы собрать правильный каркас очков, организовать кончик ногтя лицом к внешнему направлению для достижения наилучшего защитного эффекта. И, отрегулируйте угол между кончиком ногтя и рамой примерно до 130 градусов, чтобы избежать маскировки мыши видение поля. Используя клей цианоакрилата, приклейте кончик искусственного ногтя к раме и дайте клею 12 часов полностью высохнуть.
Используйте ножницы для ногтей, чтобы обрезать полностью придерживаясь кончик ногтя примерно один на один сантиметр формы и поместить объектив на раму. Ввимите клей цианоакрилата от края объектива и дайте клею распространиться поверхностным натяжением. Когда клей сухой, затяните винт в нейлоновую палочку вместе с шайбой с плоской стороны палки.
Затем подготовь левую рамку таким же образом кончиком пальца под углом в противоположном направлении от кончика правого кадра. Для базового измерения преломления в длине аксиала, применить одну каплю мидриатического агента, содержащий пять миллиграммов на миллилитр тропикамида и пять миллиграммов на миллилитр фенилэфрин гидрохлорид с каждой стороны глазного яблока, чтобы расширить зрачок. Подождите, по крайней мере пять минут до общей анестезии и отрегулируйте направление одного из глаз в видоискателе инфракрасного фото огнеупора, чтобы расповести первое изображение Пуркинье в центре зрачка и измерить преломление вдоль оптической оси.
После измерения другого глаза таким же образом, поместите мышь в спектральной области оптической системы согласованности томографии и определить длину ося как расстояние от вихря роговицы до самой яркой границы вблизи оптического нерва. Чтобы зафиксировать заранее подготовленную рамку очки на мышь, сначала нанесите одну каплю 0,1% очищенной гиалуронатной глазной капли на каждый глаз и поместите подбородок обезболивающей мыши на наклонную поверхность, чтобы передовая плоскость черепа была горизонтальной. Используйте ватный тампон, пропитанный 70% этанола для стерилизации волос и кожи головы, между ушами и глазами, и сделать разрез 0,8 квадратных см в коже, между ушами и глазами, чтобы разоблачить череп.
Используйте зубную травлю жидкости в ватный тампон, чтобы удалить periosteum и использовать пару кадров без линз, чтобы помочь исправить палку на нужное положение, тщательно регулируя положение кадров, чтобы убедиться, что оба глаза находятся в середине пустых кадров. Используйте самообслуживание зубной клей системы, чтобы прикрепить палку на голову мыши и ждать около пяти минут, прежде чем тщательно удалить раму и гайку, не изменяя положение палки. Затем ввимите 0,75 миллиграмма на килограмм атипамазола гидрохлорид интраперитонально, чтобы помочь мыши быстрее оправиться от анестезии и поместить мышь в индивидуальную клетку до полного выздоровления.
Через 24 часа после операции, схватить палку и поместить кадры с линзами на животное, чтобы инициировать индукции близорукости. Затем поместите сеть между мышью и нижней клетки, чтобы фильтровать пищевые отходы и контролировать вес тела и грубое поведение ежедневно, сравнивая миопических мышей с теми же в возрасте, нетронутых мышей в течение всего экспериментального процесса. Удалите раму и очистить линзы и кончик ногтя с ватными тампонами по крайней мере два раза в неделю для поддержания прозрачности линз.
Здесь показан набор завершенных очков для глаз. Угол между двумя кадрами может быть скорректирован, чтобы соответствовать мышей разных возрастов. После размещения очков на раме, как попродемонстрировано, два куска очков должны быть довольно симметричными.
Для этого измерения преломления в глазу мыши, вызванного отрицательным 30 диоптровым объективом в течение трех недель, начиная с послеродового дня 21, взгляд контролировался близко к нулю градусов как в оси x, так и в оси, указывая, что мышь видела прямо перед камерой. Все это изображение глаза, взятое спектральной системой оптической согласованности домена, настроенной на мышей, позволяет определить каждую часть глаза. В этом репрезентативном эксперименте отрицательные 30 диоптрических линз вызвали сильный миопический сдвиг как в измерениях преломления, так и в измерениях длины осью, по сравнению с нулевыми диоптрическими линзами.
Изменение преломления достигло пика в первую неделю и оставалось неизменным в течение следующих двух недель, в то время как разница между изменением миопического глаза и контроля длины глаз была значительной с первой недели и стала больше и больше в течение следующих двух недель. При попытке процедуры, важно помнить, чтобы внимательно следить за инструкцией для измерения преломления и аксиальный объектив, чтобы результат был сопоставим между экспериментальными лабораториями. После его разработки методика проложит путь исследователям в области близорукости к изучению патогенного механизма не только у обычных мышей, но и у генетически модифицированных мышей.
