对活鼠结肠的微型内窥镜评估为研究急性图与宿主疾病GvHD的肠道表现提供了关键的实验支持，包括全源性造血干细胞移植。急性GvHD相关结肠炎的非侵入性评估可以作为金本位组织病理学的工作替代品，从而使动物重复牺牲以获得组织标本变得没有必要。演示程序将是维拉布切尔，一个后医生从我的实验室。
在接收者BALB/c小鼠全身照射一天后，将一只CD-45.1活体5B6 SJL供体小鼠放在清洁工作护套上的易发位置，并使用一个13厘米的弯曲和锯齿状尖的模拟钳子将毛皮抬到一个致命弱点上。使用硬化的8.5厘米细剪刀与直尖，切开钳子和一脚跟之间的皮肤，拉长切口颅，以方便从后肢去除皮肤和毛皮。当皮肤从后肢上取下时，切开每个臀部、脚踝和膝盖关节。
将每个后肢的大腿和柄存放在一个装满 PVS 的 92 毫米 Petri 盘中，并小心地从每块骨头上取出尽可能多的肌肉，将每个清洁的股骨和头骨转移到湿冰上无菌 RPMI 1640 介质的 50 mL 管中。要分离骨髓，一次将一根骨头转移到一个新的92-mL培养皿中，里面装满了新鲜的RMRI 1640培养基，然后用手术刀切掉每根骨头的末端。接下来，使用装有 26 米针的 1 mL 注射器，一次用 1 mL 新鲜介质冲洗骨骼，并放入含有 5 mL 介质的 50 mL 收集管中。
当所有骨骼都齐冲洗后，轻轻移液，上下移液，产生单细胞悬浮液，然后通过40微米网状细胞滤网将细胞过滤到新的50 mL收集管中。通过离心使细胞分裂，并在5 mL氯化铵钾解液缓冲液中重新悬浮细胞，在室温下孵育3分钟。在孵育结束时，停止与10mL的PVS反应，并再次离心细胞。
将颗粒重新悬浮在2 mL新鲜PVS中进行计数，并留出6倍10至第六细胞等分，用于下游流量细胞测量分析。接下来，使用市售的细胞纯化试剂盒，根据制造商的指示，从骨髓单细胞悬浮液中对CD90.2阳性T细胞进行磁力消耗，并留出1倍10至第六细胞等分的T细胞耗竭的除液，用于下游细胞对细胞纯度和成分的分离前和分离后的分析。然后，使用装有30量针的1mL注射器，将5倍10注射到5倍的T细胞耗尽的骨髓细胞中，100微升PVS静脉注射到每个受辐射接受动物静脉窦的回溯柱空间中。
第二天，将从捐赠动物身上采集的脾脏放入 50 mL 收集管中的 40 微米网状过滤器上，并使用注射器柱塞将脾脏组织通过过滤器压入管中。用PVS清洗过滤器和柱塞，收集所有飞毛细胞，通过离心对细胞进行颗粒化。红细胞解压后，重新悬浮白细胞进行计数，并留出六倍10至第六细胞等分，用于下游流量细胞计量分析。
对于完全CD3阳性T细胞从总孢子细胞分离，使用市售细胞纯化套件根据制造商的指示，并留出1倍10至第六CD3阳性T细胞等分，用于下游流细胞对细胞纯度和成分分离前的和分离后的分析。然后，将7倍10注射到第五个全活性CD3阳性T细胞中，在100微升PVS静脉注射到每个接受小鼠的逆光杆空间，以诱导GvHD。要通过心骨结直肠区域的迷你内窥镜对GvHD相关病变进行评分，请用一只手抬起尾根上方的受接受动物的尾巴，用另一只手通过肛门小心地将内窥镜插入直肠。
当气流膨胀结肠直肠流明时，缓慢而小心地将内窥镜向前移动。为避免结肠肠损伤，请使用实时视频屏幕将内窥镜放在流明的中间区域，以帮助进行此定位。开始录制视频流并评分炎症，通过按图所示对参数进行评分来评估结肠的GvHD相关炎症。
找到计分点后，轻轻移动内窥镜，然后稍微来回移动，以评估不同的参数。要评估参数半透明性和大便一致性，请将内窥镜相对于结肠壁的内窥镜定位在更宽的距离。要评估病变的粒度和血管性，将内窥镜定位在靠近结肠壁的位置，并小心地用内窥镜的尖端将良好的张力应用到结肠壁上。
完成评分过程后，停止录制。与对照组相比，所证明的同源造血干细胞移植可产生全身GvHD表型的可重复的强健诱导，接受动物的临床GvHD分数逐渐增加。这些可评估的迷你内窥镜标准是专门根据先前报告的合成结肠炎在异体反应驱动的结肠炎评分参数的背景下，对远端结肠肠道GvHD疾病相关病变的精确描述、评分和评分。
事实上，基于微型内窥镜的分级系统能够很容易地对患有肠道炎症严重迹象的供体淋巴细胞接收小鼠进行歧视，这些小鼠基本上没有GvHD。 基于微型内窥镜的分级系统组织病理学研究证实，受GvHD相关炎症严重影响的小鼠的结肠表现出同样强烈的炎症组织病理迹象。相比之下，对照小鼠的结肠组织对炎症的轻度组织病理学症状表现出的不明显，这与实际上没有可检测到的结肠炎小内窥镜迹象一致。
此外，迷你内窥镜和组织病理学评估结肠炎活动与系统GvHD分数之间的相关研究表明，迷你内窥镜确定一些分数小于或等于三，可靠地预测缺乏中高档肠道GvHD相关结肠炎症分数从组织病理学评分获得。此外，内窥镜评估肠道GvHD的严重程度显示与全身GvHD疾病活动相关。为了标准化结肠炎症的微型内窥镜评估结果，并确保不同小鼠和实验的可比性，应选择一个定义的解剖位点进行评分。
除了评分结肠炎症外，微型内窥镜设置内内置的工作通道还允许检索适用于各种下游分析的视图引导组织活检，如标准组织病理学。由于迷你内窥镜的非侵入性，急性GvHD相关结肠炎几乎可以在任何时间在同一动物中反复评估，从而产生对肠道GvHD的迷人见解。
