随机噪声在Vitro内评估中庭前核神经元敏感性的随机噪声应用

该协议是直接将电噪声应用到组织切片中单个神经元的第一批演示之一。为了观察神经元对电刺激的反应。这种技术的主要优点是，我们能够评估单个神经元上一组特定的刺激参数。

此技术允许优化刺激参数，以特定功能神经元类型为目标。这对于开发更好的平衡功能治疗具有影响。在开始脑干提取之前，Equilibry s-ACSF 与 CARPOGEN 并冷却溶液在零下 80 摄氏度 25 分钟，直到冰浆形成。

溶液冷却后，使用编号22圆剃刀刀片，使三至五周大的C-57黑色六只小鼠的头骨的下垂皮肤切口，并使用一对标准图案剪刀的尖端，使一个小切口，从羔羊，沿着下垂缝合。使用一对浅弯皮尔森冯朱尔斯，仔细反射去修复的肠外骨和外皮骨，并在冰冷的s-ACSF中沐浴大脑。然后，用11号直剃刀刀片将脑干从前脑和骨质包裹中分离开，以切割骨质外肠骨质肉和骨质包裹。

将分离的脑干腹和下部安装到可移动切梯形聚苯乙烯块上，并使用一张纸巾从解剖组织周围去除多余的液体。使用氰丙烯酸酯胶水将聚苯乙烯块固定到切割阶段，并附着脑干 rostral 和向下。使用 0.16 毫米/秒的先进速度和 3 毫米的振动振幅获得 200 微米的 MVN 横向切片。

然后使用塑料修剪移液器将组织切片转移到过滤纸盘上，在 25 摄氏度下将ACSF移植到过滤上，至少30分钟。对于全细胞贴片夹电生理学，首先拉微移液器的最终电阻范围从三到五兆欧姆时，充满钾为基础的内部溶液，并放置在浴缸。要从 MVN 中的单个神经元获取全细胞贴片夹记录，请将单个组织切片从孵化室转移到标准电生理设置的录音室，并使用 U 形重量上的尼龙螺纹固定切片。

连续在 25 摄氏度的流量下用碳酸化 ACSF 在 25 摄氏度下连续灌装记录室，并用内部溶液填充微移液器。使用移液器施加少量正压，将碎屑从移液器尖端推开。使用低功耗目标，在切换到高功率以定位 MVN 内的单个神经元之前，找到 MVN。

在用移液器破坏组织之前，施加少量正压，将碎屑从移液器尖端推开，并使用微操纵器将移液器移向所选神经元。神经膜上应形成一个小酒窝。释放正压，施加少量负压。

一旦实现了一千兆欧姆密封，通过吸口对移液器支架施加柔和的短压和尖锐的负压，以破裂膜并创建全细胞配置。然后根据标准协议获得全单元电流夹具记录。要将随机噪声和正弦噪声应用于单个中前庭核神经元，请设置从 3 到 24 皮奥放大器的振幅范围，以确定神经元阈值和发射速率，并分组更高和更低的刺激强度来确定感觉阈值。

接下来，计算 10 秒期间的平均发射速率，在此期间，将为每个单个电流级别注入极化电流步骤。使用平均触发速率值生成触发速率与当前绘图。然后执行线性回归分析，以确定最佳拟合线的梯度，以确定神经元增益。

与控制无噪声记录相比，正弦噪声和随机噪声都未改变MVN神经元的罗勒发射速率。在此实验中，所选的噪声水平为 6 皮科安培是低于阈值的，因为可以观察到，平均发射速率开始从 12 皮科安培的实验阈值增加。此阈值通过将刺激水平分组到实验阈值上方和下方来客观地确定。

神经元增益通过使神经元受制于一套从零到 50 皮奥安培的降极电流步数，以 10 皮奥安培的增量（带无噪声）进行评估。事实上，在六皮安培的子阈值振幅下施加的正弦噪声和随机噪声可以改变 MVN 神经元的增益。既定的刺激参数可应用于神经创新单个神经元，以提供更自然的刺激。