单细胞微吸气是一种补充微生物学领域，特别是病毒学领域使用的不同技术的方法。它可以回答关键问题，并解决在巨型病毒分离过程中遇到的问题，将病毒从病毒混合物中分离出，呈现低丰度病毒，因为另一种病毒（即福斯托病毒）的流水线病毒、氏族病毒和乌齐巴蒂病毒的情况是，无论如何，这种病毒都是浮毒病毒。这种方法的主要优点是使用间接战略。
它包括分离和克隆受感染的宿主以获得病毒分离。因此，该方法监测从捕获到细胞释放的不同步骤，通过微观观察确认分拣过程。最后，分子生物学用于确认分拣和电子显微镜，以观察分离的病毒颗粒。
这种方法将解决病毒分离的主要问题。它是克隆阿梅巴或克隆蛋白的一般前景。首次尝试使用这种技术的人，在控制压力时必须严格而精确。
视觉控制对于确认仅捕获和释放一个单元格至关重要。使用VermamoebaVermiformis，菌株CDC19，作为细胞支持。在75平方厘米细胞培养瓶中，以每毫升1倍至6个细胞的浓度加入30毫升PYG培养基和3毫升阿米巴。
在孵化器中保持 28 摄氏度的文化。48 小时后，将 10 毫升阿米巴细胞培养转移到计数幻灯片上，将其置于显微镜下以量化阿米巴。要冲洗，在管子中收获30毫升的细胞培养，并在720倍G下离心，在10分钟内对阿米巴进行颗粒状。
取出上一代，在适当体积的饥饿介质中重新暂停颗粒，获得每毫升10倍到第六细胞的浓度。准备细胞支持与添加抗菌剂。在生物安全柜中，将阿米巴培养物的十倍加一十，加入两毫升的饥饿介质中。
然后接种含有病毒混合物的100毫升的库存溶液，以0.01的多重感染将细胞培养支持接种。孵育受感染的阿米巴细胞培养支持。加入30摄氏度10至14小时或直到细胞病变效应诱导，如阿米巴四舍五入或解解。
接下来，使用注射器收集介质并通过五微米过滤器过滤，以清除细胞碎片。在不同的井中对病毒样本进行谷类稀释。接种两毫升的一倍10至第六Vermamoba Vermaformis包含在每个培养皿与100毫升的混合物接种。
然后，在30摄氏度下将培养皿放入可密封的塑料袋中。感染后6小时，用倒置光学显微镜观察培养皿，每四到八小时检查一次细胞形态。抗微生物治疗用于细胞支持。
在培养皿中选择那些由真菌和细菌剂造成的视觉污染，以及由于病毒和阿米巴的预解和舍入阶段对阿米巴的细胞病变作用的证据，以避免病毒颗粒的吸入。设置带微型机械手、手动控制压力装置、倒置显微镜、即插即用电机模块、摄像头和计算机模块的工作站。选择 20 微微毛细管内径，以便维护内部位置和轻松释放电池。
将电动模块上夹持系统的操作角度固定 45 度。执行双重安装，首先在抓握系统，然后对微型毛细管。专注于细胞。
要克隆细胞，请将含有两毫升受感染阿米巴的培养皿放在显微镜下。首先关注细胞，然后关注浸入培养中的微毛细管。挑选圆形单细胞，使微毛细管更接近微操纵器。
通过手动压力控制，对细胞进行手动压力控制，将单个细胞从第一个样本中取出并释放到阿米巴的细胞培养支持中。然后在30摄氏度下孵育。仔细控制压力，以便能够渴望一个细胞，并控制你的愿望，通过观察单个细胞的释放。
使用倒置光学显微镜进行日常观察，以观察细胞的外观并监测细胞病变效应的出现。现在运行一个自动提取系统，从部分正培养样本中提取DNA，其中观察到细胞病变效应。设计底像，用于放大被注释为福斯托病毒的 RBP2 的不良基因、Usurpat 病毒的主要帽状蛋白和 Clandestino 病毒的轻微帽状蛋白。
根据手稿使用热循环器执行标准 PCR。执行 20 微升的 PCR 反应，每个引水 50 微摩尔，1X 主混合，和核糖核酸酶无水。在135伏特电压下，在1.5%的加糖凝胶上用DNA凝胶染色运行PCR产品，并用紫外线进行可视化。该协议优化了具有单细胞微吸气的微管理过程。
这种技术能够捕获一个圆形和受感染的阿米巴，并在一个包含未感染的阿米巴的新盘子里释放。这种方法成功地分离出一种名为 Userpat病毒LCD7 的新低丰度巨型病毒。您的用户帕特病毒仅在克隆七中观察到，存在 Userpatvirus LCD7 DNA 和福斯托病毒 DNA。
电子显微镜揭示了克兰德斯蒂诺病毒ST1的外观，它有一个典型的无纤维的异体形态学以及具有约250纳米的宇宙膜帽的乌苏尔帕特病毒LCD7。低细胞学证实浮士德病毒和纳沃伊鲁病毒种群的重叠。一旦掌握了，这个程序可以很容易地完成。
尝试这一程序时，要记住的最重要的事情是有必要对实体的规模进行最低限度的观察仪式，对工作站的主管进行良好处理，并检查任何污染问题。该方法可作为基于细胞形态的排序技术。目前，它用于我们的实验室克隆特定的阿米巴。
这项技术的一个关键点是保持细胞的完整性。事实上，我们可以有一些问题，不观察细胞或释放。这主要是因为细胞分解成微毛细管。
当缺陷遥测和事实排序不可用以及达到特定技术限制时，此方法可能是有效的替代方案。不要忘记，在某些情况下，细胞不会从微毛细管中释放。这部分是由于阿米巴的特性及其适应能力，然后从细胞膜。
