透明细胞肾癌或CCRCC,是肾癌最常见的亚型。局部CCRCC有良好的手术效果。然而,三分之一的CCRCC患者会发展远向肺部转移。
这导致一个非常差的结果为病人。不幸的是,没有治疗这个致命的阶段。由于转移的分子机制仍然是暗示性的。
该协议的目的是介绍和比较最近为转移性CCRCC建立的两种动物模型。第一个模型是主题植入的鼠标。在此小鼠模型中,异质CCRCC被植入小鼠的肾胶囊。
肿瘤生长和转移是10周后的资产。第二个模型是鸡胆膜模型,或CAM模型。在这个鸡模型中,异质CCRCC被植入鸡蛋中。
肿瘤生长和循环肿瘤细胞在胚胎孵化前10天植入后是资产。肺转移是植入24天后的资产。这是孵化后两周。
这两种新模型将有助于进一步研究CCRCC转移背后的分子机制。请注意,此视频中没有显示 CAM 程序。CAM 模型的详细协议由 Sharrow 等人在另一篇 Trove 文章中描述和拍摄。
麻醉鼠标后,用波维酮碘完全消毒小鼠背部三次。跟随70%的种族一次,用无菌棉签擦干。然后按顺序涂抹三个无菌医疗敷料,覆盖整个背部,以创建一个手术场,以及固定小鼠。
手术前,操作者应用碘消毒手指。将鼠标放在易发位置。并且,用手指定位左侧翼下的左肾。
使用一双钝钳和剪刀在指定位置下切开皮肤和肌肉层。使用无菌棉签和钳子将左肾部分外化出腹部。加载胰岛素注射器或定制的汉密尔顿注射器与肿瘤细胞悬浮单独准备。
在肾胶囊下注射20微升细胞悬浮液。慢慢拉出针头,以巩固额外的细胞基质溶液。以及防止出血或肿瘤细胞泄漏。
然后,使用无菌棉签将肾脏推回腹部。使用缝合缝合肌肉层。用波维酮碘消毒皮肤。
而且,用伤口自动夹关闭皮肤。正畸奠定了种植肿瘤细胞成功地生长在小鼠肾脏,由BLI证实。虽然原生长没有差异,但只有异质转移肿瘤有强大的转移到肺。
转移也得到免疫基础化学的证实。同样,携带转移性肿瘤的小鼠的循环肿瘤细胞计数高于携带非转移性肿瘤的小鼠。与小鼠模型一起,CAM模型也未显示出转移性肿瘤和非转移性肿瘤的生长差异。
另一方面,转移性肿瘤的卵子中循环肿瘤细胞的数量显著增加。在孵化鸡的肺部观察到组织上可检测到的转移。最后,本协议说明了转移性CCRCC的两种新型动物模型。
小鼠和鸡模型忠实地回顾了在诊所观察到的肺转移。这两个临床前模型将有助于扩展对转移背后的分子机制的理解。以及发现转移性CCRCC的新疗法。