El carcinoma de células renales claras o CCRCC, es el subtipo más común de cáncer de riñón. Localizar CCRCC tiene un resultado favorable con la cirugía. Sin embargo, un tercio de los pacientes con CCRCC desarrollarán metástasis distantes en el pulmón.
Lo que lleva a un resultado muy pobre para los pacientes. Desafortunadamente, no hay terapia disponible para esta etapa mortal. Como el mecanismo molecular de la metástasis sigue siendo alusivo.
El propósito de este protocolo es introducir y comparar los dos modelos animales recientemente establecidos para CCRCC metastásico. El primer modelo es el ratón de la implantación de temas. En este modelo de ratón, se implanta CCRCC heterogéneo en la cápsula renal del ratón.
El crecimiento del tumor y la metástasis son activos después de 10 semanas. El segundo modelo es el modelo de membrana corioalantoica de pollo, o el modelo CAM. En este modelo de pollo se implanta el CCRCC heterogéneo en el huevo.
El crecimiento tumoral y las células tumorales circulantes son activos después de 10 días de implantación antes de que el embrión eclosione. La metástasis pulmonar es un activo después de 24 días de la implantación. Que es dos semanas después de la eclosión.
Estos dos modelos novedosos serán útiles para seguir estudiando el mecanismo molecular detrás de la metástasis en CCRCC. Tenga en cuenta que el procedimiento CAM no aparece en este video. El protocolo detallado para el modelo CAM se describe y filma en otro artículo de Trove por Sharrow et al.
Después de anestesiar un ratón, desinfecte la parte posterior del ratón por completo con povidona-yodo durante tres veces. Siga por 70%ethnol una vez, y límpielo con hisopos estériles de algodón. A continuación, aplicar tres apósitos médicos estériles que cubran secuencialmente toda la espalda con el fin de crear un campo quirúrgico, así como para inmovilizar el ratón.
Antes de la operación, los operadores deben desinfectar sus dedos con povidona-yodo. Coloque el ratón en la posición propensa. Y, usa los dedos para localizar el riñón izquierdo justo debajo del flanco izquierdo.
Usa un par de fórceps y tijeras contundentes para abrir la piel y la capa muscular debajo de la ubicación especificada. Use hisopos y fórceps de algodón estériles para exteriorizar parcialmente el riñón izquierdo fuera del abdomen. Cargue una jeringa de insulina o una jeringa Hamilton personalizada con la suspensión de la célula tumoral preparada por separado.
Inyectar 20 microlitros de suspensión celular debajo de la cápsula renal. Tire lentamente de la aguja para solidificar la solución de matriz celular adicional. Así como para prevenir hemorragias o fugas de células tumorales.
Y luego, usa un hisopo de algodón estéril para empujar el riñón hacia el abdomen. Usa la sutura para coser la capa muscular. Desinfectar la piel con povidona-yodo.
Y, cierra la piel con auto-clips de heridas. La colocación ortotópica de células tumorales plantadas creció con éxito en ratones renales como lo confirmó BLI. Aunque no hubo diferencia en el crecimiento primario, sólo el tumor metastásico heterogéneo tenía metástasis robusta en el pulmón.
La metástasis también fue confirmada por inmunohistoquímica. Del mismo modo, los recuentos de células tumorales circulantes fueron más altos en los ratones con tumor metastásico que en aquellos que tenían tumor no metastásico. En concordancia con el modelo de ratón, el modelo CAM tampoco mostró ninguna diferencia de crecimiento entre tumores metastásicos y no metastásicos.
Por otro lado, el número de células tumorales circulantes fue significativamente mayor en los óvulos con tumores metastásicos. Se observó metástasis histológicamente detectables en los pulmones del pollo incubado. En conclusión, este protocolo ilustraba dos nuevos modelos animales para CCRCC metastásico.
Tanto el ratón como los modelos de pollo recapitularon fielmente la metástasis pulmonar observada en la clínica. Estos dos modelos preclínicas serán útiles para ampliar la comprensión del mecanismo molecular detrás de la metástasis. Así como para descubrir nuevos tratamientos para CCRCC metastásico.
