Carcinoma de células renais claras ou CCRCC, é o subtipo mais comum de câncer renal. Localização CCRCC tem resultado favorável com cirurgia. No entanto, um terço dos pacientes da CCRCC desenvolverá metástase distante no pulmão.
O que leva a um resultado muito ruim para os pacientes. Infelizmente, nenhuma terapia está disponível para esta fase mortal. Como o mecanismo molecular da metástase permanece alusivo.
O objetivo deste protocolo é introduzir e comparar os dois modelos animais recentemente estabelecidos para CCRCC metastático. O primeiro modelo é o mouse da implantação do tópico. Neste modelo de camundongo, o CCRCC heterogêneo é implantado na cápsula renal do camundongo.
O crescimento do tumor e a metástase são ativos após 10 semanas. O segundo modelo é o modelo de membrana corioallantóica de frango, ou o modelo CAM. Neste modelo de frango, o CCRCC heterogêneo é implantado no ovo.
O crescimento do tumor e as células tumorais circulantes são ativos após 10 dias de implantação antes que o embrião ecloda. A metástase pulmonar é um trunfo após 24 dias da implantação. Que é duas semanas depois de eclodir.
Esses dois novos modelos serão úteis para estudar melhor o mecanismo molecular por trás da metástase na CCRCC. Por favor, note que o procedimento CAM não é apresentado neste vídeo. O protocolo detalhado para o modelo CAM é descrito e filmado em outro artigo de Trove por Sharrow et al.
Depois de anestesiar um rato, desinfete a parte de trás do mouse inteiramente com povidone-iodo por três vezes. Siga por 70% de etnol uma vez, e limpe-o com cotonetes de algodão estéreis. Em seguida, aplique três curativos médicos estéreis que cobrem sequencialmente toda a parte de trás, a fim de criar um campo cirúrgico, bem como para imobilizar o rato.
Antes da operação, os operadores devem desinfetar os dedos com povidone-iodo. Coloque o mouse na posição propensa. E, use os dedos para localizar o rim esquerdo sob o flanco esquerdo.
Use um par de fórceps e tesouras contundentes para cortar a camada de pele e músculo sob o local especificado. Use cotonetes e fórceps estéreis para exteriorizar parcialmente o rim esquerdo do abdômen. Carregue uma seringa de insulina ou uma seringa Hamilton personalizada com a suspensão da célula tumoral preparada separadamente.
Injete 20 microliters de suspensão celular sob a cápsula renal. Puxe lentamente a agulha para solidificar a solução de matriz celular extra. Bem como para prevenir hemorragia ou vazamento de células tumorais.
E então, use um cotonete estéril para empurrar o rim de volta para o abdômen. Use sutura para costurar a camada muscular. Desinfete a pele com povidone-iodo.
E feche a pele com clipes automáticos de ferida. Células tumorais plantadas ortotópicas cresceram com sucesso em camundongos, como confirmado pela BLI. Embora não houvesse diferença no crescimento primário, apenas o tumor metastático heterogêneo tinha metástase robusta no pulmão.
A metástase também foi confirmada pela imunohistoquímica. Da mesma forma, a contagem de células tumorais circulantes foi maior nos camundongos com tumor metastático do que aqueles que têm tumor não metastático. Em concordância com o modelo de camundongos, o modelo CAM também não mostrou diferença de crescimento entre tumores metastáticos e não metastáticos.
Por outro lado, o número de células tumorais circulantes foi significativamente maior nos óvulos com tumores metastáticos. A metástase histologicamente detectável foi observada nos pulmões do frango eclodido. Em conclusão, este protocolo ilustrou dois novos modelos animais para CCRCC metastático.
Tanto o rato quanto os modelos de frango recapitularam fielmente a metástase pulmonar observada na clínica. Estes dois modelos pré-clínicos serão úteis para expandir a compreensão do mecanismo molecular por trás da metástase. Além de descobrir novos tratamentos para CCRCC metastático.
