Чистая клеточная почечная клеточная карцинома или CCRCC, является наиболее распространенным подтипом рака почек. Локализация CCRCC имеет благоприятный исход с хирургией. Тем не менее, одна треть пациентов CCRCC будет развиваться отдаленные метастазы в легкие.
Что приводит к очень плохому исходу для пациентов. К сожалению, никакой терапии для этой смертельной стадии не существует. Поскольку молекулярный механизм метастазирования остается арусивным.
Цель этого протокола заключается в внедрении и сравнении двух моделей животных, недавно созданных для метастатических CCRCC. Первая модель – это мышь для имплантации темы. В этой модели мыши, неоднородный CCRCC имплантируется в почечную капсулу мыши.
Рост опухоли и метастазы являются активом через 10 недель. Второй моделью является модель куриной хориоалантоической мембраны, или модель CAM. В этой куриной модели в яйцо имплантируется неоднородный CCRCC.
Рост опухоли и циркулирующие опухолевые клетки являются активом после 10 дней имплантации до вылупления эмбриона. Метастазы легких являются активом после 24 дней имплантации. Это через две недели после вылупления.
Эти две новые модели будут полезны для дальнейшего изучения молекулярного механизма метастазирования в CCRCC. Обратите внимание, что процедура CAM не показана в этом видео. Подробный протокол для модели CAM описан и снят в другой статье Trove Шарроу и др.
После анестезии мыши, дезинфицировать заднюю часть мыши полностью с povidone-йод в течение трех раз. Следуйте 70%ethnol один раз, и протрите его сухим стерильными ватными тампонами. Затем нанесите три стерильные медицинские повязки последовательно покрытие всей спины для того, чтобы создать хирургическое поле, а также обездвижить мышь.
Перед операцией операторы должны дезинфицировать пальцы повидоне-йодом. Поместите мышь в положение, подверженную. И, используйте пальцы, чтобы найти левую почку прямо под левым флангом.
Используйте пару тупых типсов и ножниц, чтобы разрезать кожу и мышечный слой под указанным местоположением. Используйте стерильные ватные тампоны и миппы, чтобы частично аутентизировать левую почку из брюшной полости. Загрузите либо инсулиновый шприц, либо индивидуальный шприц Гамильтона с подвеской опухолевых клеток, приготовленной отдельно.
Введать 20 микролитров клеточной суспензии под капсулой почек. Медленно вытяните иглу для того, чтобы укрепить дополнительный клеточный матричный раствор. А также для предотвращения кровоизлияния или утечки опухолевых клеток.
А потом, использовать стерильный ватный тампон, чтобы подтолкнуть почку обратно в живот. Используйте шов, чтобы сшить мышечный слой. Дезинфицировать кожу повидоне-йодом.
И, закройте кожу с раны авто-клипы. Ортопедические укладки посадил опухолевые клетки успешно вырос на мышах почки, как подтверждено BLI. Хотя не было никакой разницы в первичном росте, только неоднородная метастатическая опухоль имела надежные метастазы в легкие.
Метастазы также были подтверждены иммуногистохимией. Аналогичным образом, количество циркулирующих опухолевых клеток было выше у мышей, несущих метастатическую опухоль, чем у тех, у кого нестатическая опухоль. При согласии с моделью мыши модель CAM также не показала разницы в росте между метастатическими и немастастатическими опухолями.
С другой стороны, количество циркулирующих опухолевых клеток было значительно выше в яйцах с метастатическими опухолями. Гистологологически обнаруживаемые метастазы наблюдались в легких вылупившихся кур. В заключение, этот протокол проиллюстрировал две новые модели животных для метастатических CCRCC.
И мышь, и курица модели точно recapitulated метастазы легких наблюдается в клинике. Эти две доклинические модели будут полезны для расширения понимания молекулярного механизма метастазирования. А также открыть для себя новые методы лечения метастатических CCRCC.
