Berrak hücreli renal hücreli karsinom veya CCRCC, böbrek kanserinin en sık görülen alt tipidir. CCRCC lokalize cerrahi ile olumlu bir sonuç vardır. Ancak CCRCC hastalarının üçte birinde akciğerde uzak metastaz gelişir.
Bu da hastalar için çok kötü bir sonuca yol açar. Ne yazık ki, hiçbir tedavi bu ölümcül aşama için kullanılabilir. Metastazın moleküler mekanizması kinayeli olmaya devam eder.
Bu protokolün amacı, yakın zamanda metastatik CCRCC için kurulan iki hayvan modelini tanıtmak ve karşılaştırmaktır. İlk model konu implantasyon faredir. Bu fare modelinde, heterojen CCRCC farenin böbrek kapsülüne yerleştirilir.
Tümör büyümesi ve metastaz 10 hafta sonra varlık vardır. İkinci model tavuk koryoallantoik membran modeli, ya da CAM modelidir. Bu tavuk modelinde heterojen CCRCC yumurta implante edilir.
Tümör büyümesi ve dolaşımdaki tümör hücreleri embriyo yumurtadan çıkmadan önce 10 gün implantasyondan sonra değerlidir. Akciğer metastazı implantasyondan 24 gün sonra değerlidir. Yumurtadan çıktıktan iki hafta sonra.
Bu iki yeni model, CCRCC'de metastazın arkasındaki moleküler mekanizmayı daha fazla incelemek için yararlı olacaktır. CAM yordamı bu videoda yer almıyor. CAM modeli için ayrıntılı protokol açıklanan ve Sharrow ve ark tarafından başka bir Trove makalede filme.
Fareyi anestezi ettikten sonra farenin arkasını üç kez povidone-iyot ile tamamen dezenfekte edin. Bir kez% 70 etnol izleyin ve steril pamuk lu bezler ile kuru silin. Daha sonra bir cerrahi alan oluşturmak ve fareyi hareketsiz hale getirmek için tüm sırtı sırayla kaplayan üç steril tıbbi pansuman uygulayın.
Operasyondan önce operatörler parmaklarını povione-iyot ile dezenfekte etmelidir. Fareyi eğilimli konuma getirin. Ve sol kanadın hemen altında sol böbreği bulmak için parmakları kullanın.
Belirtilen yerin altındaki deri ve kas tabakasını açmak için bir çift künt forceps ve makas kullanın. Kısmen karın dışında sol böbrek dışlaştırmak için steril pamuk lu bezler ve forceps kullanın. Yük ya bir insülin şırınga veya tümör hücre süspansiyon ayrı ayrı hazırlanan özelleştirilmiş Hamilton şırınga.
Böbrek kapsülünün altına 20 mikrolitre hücre süspansiyonu enjekte edin. Ekstra hücresel matris çözeltisini sağlamlaştırmak için iğneyi yavaşça çekin. Yanı sıra kanama veya tümör hücre sızıntısı önlemek için.
Ve sonra, böbreği karnına geri itmek için steril pamuklu bir bez kullanın. Kas tabakası dikiş için dikiş kullanın. Povison-iyot ile cildi dezenfekte.
Ve, yara oto klipleri ile deri kapatın. Ortotopik döşenen tümör hücreleri başarıyla BLI tarafından doğrulanan fare böbrek büyüdü. Primer büyümede bir fark olmamasına rağmen, sadece heterojen metastatik tümörün akciğerde sağlam metastazı vardı.
Metastaz immünohistokimya ile de doğrulandı. Benzer şekilde, metastatik tümör taşıyan farelerde dolaşımdaki tümör hücre sayımları metastatik olmayan tümörtaşıyanlara göre daha yüksekti. Fare modeli ile uyum içinde CAM modeli de metastatik ve metastatik olmayan tümörler arasında büyüme farkı gösterdi.
Öte yandan, metastatik tümörleri olan yumurtalarda dolaşan tümör hücrelerinin sayısı anlamlı olarak yüksekti. Yumurtadan çıkan tavuğun akciğerlerinde histolojik olarak saptanabilen metastaz gözlendi. Sonuç olarak, bu protokol metastatik CCRCC için iki yeni hayvan modelleri resimli.
Hem fare hem de tavuk modelleri klinikte gözlenen akciğer metastazının recapitulated. Bu iki pre-klinik model metastaz arkasındaki moleküler mekanizmanın anlayışını genişletmek için yararlı olacaktır. Yanı sıra metastatik CCRCC için yeni tedaviler keşfetmek için.
