Klares Zellnierenzellkarzinom oder CCRCC ist der häufigste Subtyp von Nierenkrebs. Lokalisierung CCRCC hat günstiges Ergebnis mit Operation. Ein Drittel der CCRCC-Patienten wird jedoch eine entfernte Metastasierung der Lunge entwickeln.
Das führt zu einem sehr schlechten Ergebnis für die Patienten. Leider gibt es für dieses tödliche Stadium keine Therapie. Da der molekulare Mechanismus der Metastasierung anspielbar bleibt.
Ziel dieses Protokolls ist es, die beiden tierseuchenischen Modelle einzuführen und zu vergleichen, die kürzlich für metastasierende CCRCC eingeführt wurden. Das erste Modell ist die Maus des Themas Implantation. In diesem Mausmodell wird heterogene CCRCC in die Nierenkapsel der Maus implantiert.
Tumorwachstum und Metastasen sind nach 10 Wochen aktiv. Das zweite Modell ist das Hähnchen-Chorioallanto-Membranmodell oder das CAM-Modell. In diesem Hühnermodell wird das heterogene CCRCC in das Ei implantiert.
Tumorwachstum und zirkulierende Tumorzellen sind nach 10 Tagen Implantation vor dem Schlüpfen des Embryos von Vorteil. Lungenmetastasen sind nach 24 Tagen der Implantation aktiv. Das ist zwei Wochen nach dem Schlüpfen.
Diese beiden neuartigen Modelle werden nützlich sein, um den molekularen Mechanismus hinter der Metastasierung in CCRCC weiter zu untersuchen. Bitte beachten Sie, dass das CAM-Verfahren in diesem Video nicht enthalten ist. Das detaillierte Protokoll für das CAM-Modell wird in einem anderen Trove-Artikel von Sharrow et al. beschrieben und gefilmt.
Nach der Anästhesisierung einer Maus, desinfizieren Sie die Rückseite der Maus vollständig mit Povidon-Jod für dreimal. Folgen Sie einmal 70%Ethnol und wischen Sie es mit sterilen Wattestäbchen trocken. Dann wenden Sie drei sterile medizinische Dressing sequenziell abdeckung den gesamten Rücken, um ein chirurgisches Feld zu schaffen sowie die Maus zu immobilisieren.
Vor der Operation sollten die Bediener ihre Finger mit Povidon-Jod desinfizieren. Platzieren Sie die Maus in der anfälligen Position. Und verwenden Sie die Finger, um die linke Niere direkt unter der linken Flanke zu lokalisieren.
Verwenden Sie ein Paar stumpfe Zangen und Scheren, um die Haut- und Muskelschicht unter der angegebenen Position zu schneiden. Verwenden Sie sterile Wattestäbchen und Zangen, um die linke Niere teilweise aus dem Bauch herauszudrängen. Laden Sie entweder eine Insulinspritze oder eine maßgeschneiderte Hamilton-Spritze mit der Tumorzellsuspension separat vorbereitet.
Injizieren Sie 20 Mikroliter Zellsuspension unter die Nierenkapsel. Ziehen Sie langsam Nadel heraus, um die zusätzliche zelluläre Matrixlösung zu verfestigen. Sowie blutungen oder Tumorzelllecks zu verhindern.
Und dann verwenden Sie einen sterilen Wattestäbchen, um die Niere wieder in den Bauch zu schieben. Verwenden Sie Naht, um die Muskelschicht zu nähen. Desinfizieren Sie die Haut mit Povidon-Jod.
Und schließen Sie die Haut mit gewickelten Autoclips. Orthotopische Verlegung gepflanzt Tumorzellen erfolgreich auf Mäusen Niere wuchs, wie durch BLI bestätigt. Obwohl es keinen Unterschied im primären Wachstum gab, hatte nur der heterogene metastasierende Tumor eine robuste Metastasierung in die Lunge.
Die Metastasierung wurde auch durch Immunhistochemie bestätigt. In ähnlicher Weise waren die zirkulierenden Tumorzellzahlen bei Mäusen, die einen metastasierenden Tumor tragen, höher als bei Mäusen, die einen nicht-metastasierenden Tumor tragen. In Übereinstimmung mit dem Mausmodell zeigte das CAM-Modell auch keinen Wachstumsunterschied zwischen metastasierenden und nicht-metastasierenden Tumoren.
Auf der anderen Seite war die Anzahl der zirkulierenden Tumorzellen in den Eiern mit metastasierenden Tumoren signifikant höher. In der Lunge von geschlüpftem Huhn wurde eine histologisch nachweisbare Metastasierung beobachtet. Abschließend illustrierte dieses Protokoll zwei neuartige Tiermodelle für metastasierende CCRCC.
Sowohl die Maus als auch die Hühnermodelle rekapitulierten die in der Klinik beobachtete Lungenmetastasierung getreu. Diese beiden präklinischen Modelle werden nützlich sein, um das Verständnis des molekularen Mechanismus hinter der Metastasierung zu erweitern. Sowie um neue Behandlungen für metastasierende CCRCC zu entdecken.
