该协议已经使用了40多年，仍然是大鼠乳腺细胞移植检测的唯一可靠方法。该方法在乳腺癌易感性研究中被广泛用于研究乳腺细胞自主性与宿主效应。通过移植在细胞间脂肪垫中，这种方法避免了必须清除内源膜上皮，这在大鼠身上无效。
因此，该方法的侵入性较小，内源性乳腺可用作内部控制。要开始这个程序，把一只安乐死的雌性大鼠放在它的背上，用针钉固定它。用70%乙醇喷洒整个腹体表面。
做一个下垂的Y形切口，允许进入胸腔，腹部和肠内乳腺。使用剪刀解剖来自捐赠大鼠的所有乳腺组织，并去除所有可见的淋巴结。接下来，使用钳子提取乳腺组织。
将它放在一个标有 60 毫米的盘中，里面装着 500 微升的无血清 DMEM F12 介质，并放在冰上。然后用剪刀细磨乳腺组织。首先，小心地将捐赠动物的身体翻过来，将其放在一个容易的位置，用针脚固定它。
用 70% 乙醇喷洒头部和上背部。找到头骨的底座，在腹孔下做一个切口，在皮肤下面插入锋利的剪刀，将皮肤从头骨（包括头部两侧）切开。接下来，使用骨刀或强剪刀将头骨沿着中线从腹骨切到正面骨骼，同时确保刀片尽可能肤浅，向上倾斜，以防止底层脑组织的破坏。
使用荣器或强钳剥去骨头。将工具横向插入小脑以打破两侧的骨骼。通过完全暴露听觉管切断与毛耳的连接。
使用弯曲的细尖钳将大脑从头骨中抬出并记录其重量。使用新的开始供应为额外的捐赠者的大脑。立即将其转移到含有同等数量的储存在冰上的介质的15毫升管中。
在低速下使大脑均质10到15秒。然后过滤均质以去除大块。将液体储存在冰上，直到需要。
首先，从1000微升移液器尖端的末端切开一厘米，然后手动将其放在移液器上。使用切移液器尖端将切碎的供体组织从每60毫米培养皿转移到胶原酶消化管。轻轻混合切碎的组织，上下移液一到两次。
然后将样品固定在摇摇培养箱的水平位置。让样品在 37 摄氏度下消化 1.5 到 2 小时，同时以 200 到 220 RPM 的速度摇动。当供体乳腺组织完全消化时，在1，200倍g和4摄氏度下将悬浮液离心10分钟。
确保颗粒形成后，使用移液器去除脂肪层或小心地倒出上流液。轻轻将颗粒重新在 10 毫升新鲜 DMEM F12 介质中。重复此过程以彻底清洗细胞。
为每个捐赠动物准备一个50毫升的管子，用40微米过滤器。使用至少一毫升 DMEM F12 介质预湿过滤器。然后使用移液器通过过滤器通过细胞悬浮液，收集导管碎片或器官。
对于器官，只保留留在过滤器中的细胞。将细胞过滤器倒置到新的 50 毫升管上，然后用收集所有细胞所需的任何无菌介质冲洗。在此之后，再次对细胞进行颗粒化，并在少量介质中重新暂停以进行计数。
通过将细胞悬浮液的相等体积与每个移植地点50%脑均质的相等量相结合，为所有移植接受者准备单批供体材料。首先，确定头骨的基底，并在受接受动物上开始椎柱。大约三分之一的路下脊柱，剃一个三厘米的两厘米区域在背部的上胸部分。
接下来，准备用于手术的无菌场，并安排所有需要的用品。用无菌 DMEM F12 介质冲洗汉密尔顿注射器，防止细胞丢失。将整个捐赠物质的体积加载到单独的注射器中，用于每种情况。
注射器充满后，反转并稍微按压柱塞，以清除针头尖的气泡。在整个过程中，将注射器放在冰上。确保动物对深层刺激无反应，用坚定的脚跟捏合。
然后使用锋利的手术刀片，使一个小的间切。找到内侧血管的方向，并使用钳子抬起切口一侧的皮肤。将皮肤远离脂肪垫，在进行移植时避免潜在的棕色脂肪。
接下来，将针头插入移植物。小心地将40微升的细胞混合物注入细胞间白色脂肪垫组织。慢慢取出针头。
将组织放在位上，让移植的细胞沉淀三到五秒钟。重复整个注射过程，如之前在移植的第二个部位所述。在此之后，使用伤口夹或缝合关闭手术伤口，然后停止麻醉。
牺牲动物后，准备解剖。确定分离间体脂肪垫中移植位点的中侧血管。将整个垫作为一块纸巾进行切除。
将组织放在带正充电的显微镜幻灯片上，用于整个安装。将幻灯片放在70%乙醇中7至10天，使组织脱脂。然后准备铝卡明污渍，当组织足够不透明时处理幻灯片。
当处理完成且幻灯片上的组织已清除时，使用低功率光显微镜或高分辨率数字摄影获取幻灯片的图像进行分析。在这项研究中，乳腺上皮细胞被移植使用一种优化的技术，用于与大鼠合作，其中从捐赠大鼠分离的乳腺上皮器官被移植到受体大鼠的间皮白脂肪垫中。可以评估上皮的存在、缺失或丰度，以确定实验的成功以及与实验变量相关效应的自主性。
一个互惠移植实验，其中每个因素有两个级别，如野生类型与淘汰将创建四个移植组假设检验。此处所示的具有代表性的整个安装体间脂肪垫在两个移植点都包含正上皮生长。在分析幻灯片时，许多样品中膜间脂肪垫中缺乏上皮可能表明程序存在技术问题，应视为负结果。
捐赠者上皮生长也可以与内源性乳腺进行比较，并可能促进其他结论。在下面所示的示例中，使用野生型和 CDKN1B 敲除大鼠的互惠移植结果表明，非乳腺细胞自主作用对乳腺发育。请记住，供体上皮细胞和器官必须精心准备并保持存活，直到注射到受体动物中。
必须提前计划，并认真执行程序，不中断。原发致癌检测可以在移植后进行，以询问乳腺细胞在病因或乳腺癌治疗中的自主性。基因编辑也可以结合到基因工程的供体细胞或接受大鼠。
作为大鼠进行乳腺上皮细胞移植的唯一方法，该手术有助于乳腺发育和致癌研究。这项技术对于研究乳腺癌细胞和/或乳腺上皮细胞与宿主微环境之间的相互作用尤为重要。它支持乳腺发育和乳腺癌研究。
首次尝试这种技术的人应优化供体细胞制剂，以确保最大的细胞产量和生存能力，然后进行小型试验实验，以练习外科手术，并确定注射的细胞数量，并确定实验所需的手术后孵育时间。
