Bu protokol, yüksek tekrarlanabilirlik ve çok yüksek sağkalım oranları ile farelerde tam omurilik traneksiyonu neden hassas, cerrahi kontrollü yaralanma sağlar. Kemik yaralanması için ince bir matkap kullanımı, yaralanma ve tedavi yanıtları daha doğru modellenmiş izin, çevre dokuhasarı en aza indirir. Bir laminektomi gerçekleştirmek için, anestezi sekiz ila 10 haftalık kadın C57 siyah 6 fare pedal refleks yanıt eksikliği doğruladıktan sonra, sırt omurga üzerinde cerrahi alanı ortaya çıkarmak için arka kürk tıraş ve povidone iyot antiseptik sıvı ve cerrahi ruhu batırılmış steril pamuk bezleri ile traş alanı sterilize.
Bir neşter kullanarak, T10 vertebral düzeyinde dikey bir orta hat kesi yapmak ve retractor yerleşimi kolaylaştırmak için altta yatan fasya deri kaldırmak için düz forseps kullanın. T9'un omurgalarını T11 omurları ile ortaya çıkarmak için, deri altı doku ve altta yatan fasyada küçük bir orta hat kesi yapmak için neşterin künt kenarını kullanın ve künt diseksiyon ve fasya yansıtmak için ince uçlu keskin olmayan çalgılar kullanın. Lamina ortaya çıkarmak için, Dorsal gövde ve paraspinöz kasları T11 vertebra ile T9 omurgaları boyunca bölmek için neşter künt ucu kullanın ve omurların lamina ortaya çıkarmak için katmanlarda kasları künt incelemek için künt ince uç forceps kullanın.
T10 vertebrae enine süreçleri etrafında küçük cepler yapmak ve T10 vertebra gövdesi stabilize etmek için oluşturulan cepler içinde enine süreçler altında eğri forceps uçları kanca aynı çterler kullanın. T10 laminasını sıcak tuzlu suyla iyice durulayın ve kemikyüzeyini nazikçe temizlemek için pamuklu bezler kullanın, kas veya bağ eklerinin çift taraflı yüzey boyunca kalmamasını önleyin. Laminayı iki taraflı olarak kırmak için, T9/T10 intervertebral uzaydan T10/T11 intervertebral uzaya doğru, matkap kapalı hem de T10 laminas boyunca dikey bir yol izlemek için 0,55 milimetre çapında, yedi milimetre uzunluğunda matkap ucu kullanın.
Yol izlendiğinde, matkabı açın ve omurları stabil tutmak için kavisli forceps kullanarak T10 omurunun sağ laminasına yavaşça ve dikkatlice dikey bir siper yapın. Laminanın sol tarafındaki işlemi tekrarladıktan sonra, kalan kemik parçalarını temizlemek için dokuyu sıcak tuzlu suyla sulayın. Tek elle omurga üzerinde iyi bir kavrama bakımı bu adım için gereklidir.
Ayrıca matkap kullanarak rahat ve kendinden emin olmak önemlidir. Daha sonra, spinous süreci kavramak ve ikili delme ile ayrılmış laminatüm dorsal segmenti kaldırmak için açılı ince uç forceps kullanın. Daha sonra, lamineektomi penceresi içinde omuriliğin net bir şekilde görüntülenmesi için gerektiğinde sulayın ve bez alın.
Maruz kalan kordon içinde omurilik yaralanması neden olmak için, laminektomi penceresinin merkezinde kordon dilimlemek için dar, yuvarlak kesme kenarlı bıçak kullanın, tam bir transection yaralanma neden omurilik lateral girintisüpürmek için dikkat. Tradalan yaralanmasının tamlığını doğrulamak için, transection yerinde kalan bağlantıları kaldırmak için künt ince uç forceps kullanın. Hemostaz transection sitesinde elde edildikten sonra, T10 omurüzerinde kavisli forcep kavrama serbest ve iyi bir adem elde etmek için orta hat boyunca birlikte parçalanmış kasların kenarlarını getirmek.
5/0 poliglactin 910 emilebilir dikişler kullanarak, omurganın doğal eğriliği dikiş hattında herhangi bir gerginlik neden olmaz emin olun, katmanları kasları dikiş veya dikişleri açmak. Daha sonra, subkutan doku ve deri kapatmak için 5 / 0 emilemez ipek dikişkullanın, hiçbir kanama, pıhtı, ya da enkaz kapanmadan önce cilt altında kalan olduğunu dikkat. Farelerde trazeksiyon tipi omurilik yaralanmasına neden olan bu yöntemin tekrarlanabilir ve tutarlı olup olmadığını değerlendirmek için, yaralı omuriliğin immünohistokimya sıve davranışsal testleri ile analiz edilebilmektedir.
Astrosit belirteci, glial fibrillary asidik proteine karşı immüno-etiketleme, bozulmamış omuriliğin sınırının çizilmesine olanak kolaylaştırır. Bu uzunlamasına bölümde, bulunan yaralanma yeri beklendiği gibi kordon kütükleri arasında görselleştirilebilir. Ortalama minimum mesafe 550,4, artı veya eksi 17,3 mikrometre olan transection bölgesinde tutarlı bir boyut kusuru indüklenebilir.
Açık alan testinin Basso Mouse Ölçeği'ni dağıtan davranışsal veriler, yaralı farelerin yaralanmadan sonra arka ekstremite hareketi sergilemediğini göstermektedir. Böylece protokol, yaralanma seviyesinin altında tam bir fonksiyon kaybına yol açan ve felcin kendiliğinden tersine dönmesine yol açmayan tam ve güvenilir bir trazeksiyon tipi yaralanma üretir. Yanlış delindikten sonra laminektomi penceresini onarmak çok zor olabileceğinden, sabit bir el ile düz bir çizgide delmeye özen edin.
Omurilik yaralanması indüksiyonundan sonra, omurilik yaralanması iyileşmesini iyileştirecek potansiyel tedavileri belirlemek için ilaç dağıtımı ve hücre nakli de dahil olmak üzere çeşitli tedavi seçenekleri uygulanabilir.
