Этот протокол обеспечивает точную, хирургически контролируемую травму, чтобы вызвать полную трансекцию спинного мозга у мышей с высокой воспроизводимостью и очень высокой выживаемости. Использование тонкой дрель для травмы кости сводит к минимуму ущерб окружающим тканям, что позволяет травмы и лечения ответы будут смоделированы с большей точностью. Для выполнения ламинэктомии, после подтверждения отсутствия реакции на педаль рефлекс в анестезированной 8 до 10 недель самка C57 черный 6 мыши, бритья спины меха подвергать хирургической области над спинной позвоночника и стерилизовать бритую область с стерильными тампонами хлопка пропитанной povidone йод антисептической жидкости и хирургического духа.
Используя скальпель, сделать вертикальный разрез средней линии на уровне позвонков T10 и использовать прямые миппы, чтобы поднять кожу от основной фасции, чтобы облегчить размещение втягивателя. Чтобы разоблачить шипы T9 через T11 позвонков, использовать тупой край скальпеля, чтобы сделать небольшой разрез средней линии в подкожной ткани и основной фасции и использовать тонкий кончик не острые миппы, чтобы тупой вскрыть и отразить фасции. Чтобы разоблачить laminae, использовать тупой кончик скальпеля, чтобы разделить спинной ствол и параспинные мышцы вдоль шипов T9 через T11 позвонков и использовать тупой тонкой миппы кончика тупой расстегывать мышцы слоями подвергать laminae позвонков.
Используйте те же щипцы, чтобы сделать небольшие карманы вокруг поперечных процессов позвонка T10 и зацепить зубцы изогнутых щипцов под поперечными процессами в созданных карманах для стабилизации позвоночного тела T10. Тщательно промыть T10 laminae с теплым солевым раствором и использовать ватные тампоны, чтобы аккуратно протрите костлявую поверхность чистой, заботясь о том, чтобы мышцы или связки вложения остаются вдоль двусторонней поверхности. Чтобы сломать laminae двусторонне, используйте диаметр 0,55 миллиметра, семь миллиметров длины сверла бит наконечник проследить вертикальный путь от T9/T10 межпозвонкового пространства в T10/T11 межпозвонкового пространства вдоль обоих T10 laminae с буром.
Когда путь был прослежен, включите сверло и медленно и осторожно сделать вертикальную траншею на правой ламины позвонка T10, используя изогнутые типсы, чтобы сохранить позвоночник стабильной. После повторения процесса на левой стороне ламины, орошать ткани теплым солевым раствором, чтобы смыть все оставшиеся фрагменты костей. Поддержание хорошего сцепления на позвоночнике одной рукой имеет важное значение для этого шага.
Важно также, чтобы стать комфортно и уверенно с помощью сверла. Далее используйте угловые тонкие тиски наконечника, чтобы схватить спинной процесс и удалить весь спинной сегмент ламина, разделенный двусторонним бурением. Затем орошать и мазок по мере необходимости, чтобы дать четкую визуализацию спинного мозга в окне ламинэктомии.
Чтобы вызвать повреждение спинного мозга в пределах открытого шнура, используйте узкий, круглый резки краями лезвие нарезать шнур в центре окна ламинэктомии, заботясь, чтобы подмести боковой углубления позвоночника, чтобы вызвать полную травму трансекции. Чтобы подтвердить полноту травмы трансекции, используйте тупые миппы тонкой наконечника, чтобы удалить все оставшиеся соединения на месте перегиба. После того, как гемостаз был достигнут на участке перепыления, отпустите сцепление изогнутого forcep на позвонке T10 и свяйте края расчлененных мышц вместе вдоль средней линии для достижения хорошего аппозиции.
Используя 5/0 полиглактина 910 абсорбируемых швов, шов мышц в слоях, убедившись, что естественная кривизна позвоночника не вызывает никакого напряжения на линии шва или открыть швы. Затем используйте 5/0 неаспасаемых шелковых швов, чтобы закрыть подкожные ткани и кожу, заботясь о том, чтобы под кожей не осталось кровотечения, тромбов или мусора перед закрытием. Чтобы оценить, является ли этот метод для индуцирования трансекции типа травмы спинного мозга у мышей воспроизводимым и последовательным, раненый спинной мозг может быть проанализирован иммуногистохимии и поведенческие испытания могут быть выполнены на мышах.
Иммуномаркирование против астроцитов маркера, глиального фибриллярного кислого белка, облегчает демаркацию границы нетронутого спинного мозга. В этом продольном разделе место повреждения можно визуализировать между пнями шнура, как ожидалось. Последовательный дефект размера может быть вызван на участке трансекции со средним минимальным расстоянием 550,4, плюс-минус 17,3 микрометра.
Поведенческие данные, развертывающие шкалу бас-мышей открытого полевого теста, показывают, что у раненых мышей нет движения задних конечностей после травмы. Таким образом, протокол производит полную и надежную травму типа трансекции, что приводит к полной потере функции ниже уровня травмы, что не приводит к спонтанному развороту паралича. Позаботьтесь, чтобы просверлить по прямой линии со стабильной рукой, потому что это может быть очень сложно восстановить окно ламинэктомии, как только он был пробурен неправильно.
После индукции травмы спинного мозга, различные варианты лечения могут быть применены, в том числе доставки лекарств и трансплантации клеток для выявления потенциальных методов лечения, которые улучшают восстановление спинного мозга травмы.
