此处描述的协议使得能够识别能够以高通量方式显著影响细菌持久性的条件成为可能。这种方法很容易适应筛选各个领域，如药物面板，基因库等。由于该方法包括各种子步骤，这些子步骤将同时进行，视觉演示可以帮助研究人员管理其时间以获得精确的结果。
首先准备微阵细胞培养。将250微升的指数相细胞转移到50毫升离心管中25毫升的新鲜改性LB介质。然后轻轻地混合细胞悬架，使其均匀。
将稀释后的细胞悬架转移到无菌的 50 毫升储液池中。使用多通道移液器，将细胞悬架的150微升转移到含有各种化学物质的微阵道板的每口井中。也可以按照文本手稿中描述的方法手动生成微阵列。
用气体透气天花板膜覆盖微型阵骨板，在37摄氏度和250 RPM的轨道摇床中孵化24小时。要制作持久性检测板，在 50 毫升离心管中准备 25 毫升的改性 LB 介质，其中含有每毫升 Ofloxacin 的 5 微克，并将该介质转移到无菌储液库。将 190 微升的改性 LB 介质转移到普通平底 96 井板的每口井中。
24 小时孵育后，从摇床中取出微阵骨，将 10 微升细胞培养物从微阵拉转移到含有改性 LB 介质的持久检测板的井中，并含有 Ofloxacin。从坚持体论文板中取出 10 微升细胞悬架，并使用圆底 96 井板和多通道移液器在 290 微升 PBS 解决方案中连续稀释 3 次。然后在无抗生素的新鲜阿加板上发现所有连续稀释细胞悬浮物的 10 微升。
用气体透气天花板膜盖住持久性检测板，在37摄氏度和250转速的轨道摇床中孵化6小时。经过六个小时的孵化，重复序列稀释，并在阿加板块上发现。在37摄氏度下孵化阿加板块16小时。
然后计算殖民地形成单位或CFI。在抗生素治疗前后六小时使用CFU水平来计算每口油井中的坚持者分数。在 OFX 治疗之前，CFU 计数还有助于评估渗透物对大肠杆菌生存能力的影响。
将250微升的指数相细胞转移到25毫升的新鲜改性LB介质中，其中含有从微阵骨筛选中识别的渗透物。在 250 RPM 和 37 摄氏度的轨道摇床中孵化烧瓶，24 小时。24 小时后，从摇床中取出烧瓶，将细胞培养物的 250 微升转移到 250 毫升的新鲜改性 LB 介质中， 以 250 毫升的迷惑烧瓶。
在细胞悬架中加入 25 微升的 Ofloxacin 库存溶液，轻轻摇动烧瓶，使检测培养物均匀。在 37 摄氏度和 250 RPM 的摇床中孵化烧瓶。在治疗期间的每一小时，包括添加 Ofloxacin 之前的一个时间点，将一毫升的检测培养物从烧瓶转移到 1.5 毫升的微型离心管，并在 3 分钟内以 17，000 倍 G 的离心机将其转移。
取出 950 微升超细剂，用 950 微升 PBS 洗涤细胞三次。最后洗涤后，将细胞颗粒重新悬浮在 100 微升 PBS 溶液中。取10微升的细胞悬架，并连续稀释6次与90微升的PBS内96圆底板。
在无抗生素的阿加板上发现稀释细胞悬浮物的 10 微升。为了增加检测极限，将剩余的90微升细胞悬浮在新鲜的阿加板上。在 37 摄氏度下孵化板 16 小时，然后计算 CF。
此处显示了用于确定 OFX 治疗前后细胞培养 CFU 水平的 agar 板的代表性图像。第一列是控制组。第二列含有在硝酸钠100毫升培养的细胞，第三列含有在60毫升硝酸钠中培养的细胞。
简单来说，这里只集中了两个渗透器。此处显示了来自 96 个井板测试的细胞培养的板和持久部分的 CFU 数据的图形表示。为了计算分数，坚持者计数与抗生素治疗前获得的细胞计数正常化。
为了产生阶段性杀伤曲线，细胞在25毫升的改性LB介质中培养，用指示的渗透物和困惑的烧瓶24小时，然后转移到坚持者检测烧瓶中，供坚持者列举。在尝试此协议时，请记住，在 agar 板上发现细胞是劳动密集型的，需要集中注意力。步骤过程中的错误可能导致正在测试的条件下交叉污染。
因此，在实验前同时练习发现多个样本非常重要。按照此协议，可以筛选药物面板和突变细胞库，以研究对持久性的影响。通过这次筛查，我们发现了一些对细菌持久性有重大影响的渗透物和PS条件。
