穆林切除伤口愈合模型与组织学形态性伤口分析

该协议使用组织学分析，以获得对小鼠切除伤口的强健形态测量。使用这种技术，我们可以使用串行部分的子集来分析整个伤口，使我们能够更准确地检测可能遗漏的缺陷。展示这个程序的将是林赛·瑞亚，一个来自我实验室的副研究员。

在确认麻醉成年小鼠对踏板反射缺乏反应后，对动物的眼睛涂抹软膏，并在肩-肩形运动中使用电动剃须刀剪子，以去除肩部小鼠背部的毛皮。使用剃须刀刀片从背部 20 度角在旋转-肌体运动中去除暴露的皮肤的任何剩余头发，然后用一个波维酮碘和一个 70%异丙醇准备垫擦拭清洁皮肤。对于伤口感应，将干净的纸质毛巾披在覆盖着牙蜡的平坦表面上，然后将鼠标放在毛巾的易发位置。

沿着后心中线在肩部刀片之间捏住鼠标的皮肤，将夹紧的皮肤从身体上拉开。将鼠标切换到侧卧位置，将所需伤口大小的活检冲头尽可能靠近身体，让皮肤放松。使用摇摆动作按下冲孔，刺穿皮肤的所有层，并使用无菌剪刀和钳子从伤口上去除冲孔活检，以必要时从周围皮肤上释放冲孔。

然后让鼠标通过监测和镇痛恢复。对于伤口床的形态分析，打开数字染色伤口图像。要设置比例和测量首选项，请在"分析"下选择"设置比例"并输入以像素为单位的距离、已知距离和长度单位。

选择"全局"和"确定"可使每个打开的图像的缩放保持不变，然后选择"分析"和"设置测量"以确认已选中区域框。要测量伤口长度，请选择徒手，并使用工具沿皮肤-表皮结段进行跟踪，从伤口一侧未受伤组织的最后一个毛囊开始，到另一侧未受伤组织的第一个毛囊。如果表皮不覆盖整个伤口，跟随伤口一侧的皮皮-表皮结，迁移舌头结束，并继续遵循造粒组织或造粒组织与鳞片之间的交汇点，直到到达伤口另一侧未受伤组织的迁移舌头和未受伤组织的第一个毛囊。

然后单击"分析和测量"。测量的长度将显示为与刻度中设置的相同单位。如果表皮未覆盖整个伤口，则根据造粒组织优越的方面或造粒组织与鳞片之间的交汇点测量每个表皮前缘之间的距离。

要测量伤口区域，请使用徒手工具沿表皮的优越方面或造粒组织的优越方面进行跟踪，从伤口一侧未受伤的组织的最后一个毛囊开始，到另一侧未受伤的组织的第一个毛囊。继续沿着毛囊垂直追踪到造粒组织。一旦到达相反的毛囊和脂肪组织或肌肉，沿着造粒组织的劣边界到伤口的对面，并沿毛囊连接起点以关闭该区域。

如果伤口未完全上皮化，沿表皮的优越方面进行跟踪，直到前缘，然后返回到皮肤-表皮结后的起点。如图所示，在整个伤口进行二D测量时，我们能够仅对伤口中间进行二D分析，从而计算出不可能计算的参数，这是现场常用的方法。在这个实验中，对伤口面积进行了二D测量，对整个伤口或伤口的中间子集进行了平均测量，并未发现实验组或分析方法之间的显著差异。

然而，计算出的伤口体积在实验组之间有显著差异，这证明了对伤口愈合参数进行深入组织学分析的重要性。为组织学分析生成一致大小的伤口并执行严格的串行剖截，对于精确的形态分析至关重要。未染色的部分可用于免疫荧光或马森的三色染色，以测量伤口愈合的其他方面，而闪光冷冻伤口可用于形态测定，用于定量蛋白质分析。