在行为和刺激反应期间为整个大脑成像准备成人德罗索菲拉褪黑麦片加斯特

我们的协议允许在行为过程中对整个飞脑进行成像，这对理解不同大脑区域的神经元如何相互作用来塑造行为非常重要。与其他公布的协议不同，这是专门为进入整个大脑而开发的，而苍蝇的行为和感应是由气味、味道或视觉刺激。创建头部插槽。

使用 3D 打印机打印支架后，将一块胶带矩形地放在立体显微镜下的平面上。并削减约五毫米一厘米一块。使用两个平行固定在一起的手术刀，在胶带的较长侧中间切下一个 400 到 400 微米的插槽，并将胶带放在支架底部孔的平坦侧。

使用钳子将胶带推入孔周围约 500 微米。并使用黑色指甲油覆盖磁带和支架的顶部。让指甲油干燥至少一小时后，使用卷组织在头部槽中加入大约一微升的润滑脂。

为了准备身体槽，将大约两厘米宽的胶带切成两块，切成1.5毫米宽的切片。然后切出一个 0.3 毫米深的肩膀和身体槽，并确保胶带适合支架。要将苍蝇固定在支架上，首先在解剖显微镜下放置一个装有冰的浅容器，并将支架倒置到放置在冰面上的一块实验室组织上。

吸气一到四天的雌性果蝇从它的卑鄙，并吹到未融化的冰上苍蝇。当苍蝇停止移动时，使用戴尔钳子抓住机翼底部的苍蝇，然后用插槽内的颈部将苍蝇滑入支架。眼睛应同样位于插槽的两侧。

如果需要，在头部顶部加入一微升润滑脂，以防止胶水到达头部后部。然后用纸巾和冰覆盖身体，以确保苍蝇不会移动。为了保护头部，将其从完全后视图放置在大约 20 度角处。

并使用卷起的组织在头部周围涂抹紫外线胶水，同时避免弄脏感兴趣的感官区域。对于味觉实验，使用钳子拉出前体，并在前体底添加胶水，以防止运动。如果没有口味实验计划推和胶水的概率到头部。

用紫外线将胶水固化五秒钟，并使用卷起的组织仔细清洁头部周围的区域，去除任何可能粘在腿部和门土壤、感官区域的剩余液体胶水。然后使用薄薄的胶带或组织在必要时将腿移到前面。要定位身体，取出冰容器并扭转支架。

取出苍蝇周围的水，在苍蝇从麻醉中恢复过来之前迅速行动，将身体槽带放在孔上，轻轻地将苍蝇的身体向下推，注意不要过度伸展颈部。用胶带覆盖剩余的任何大孔，并在后脑勺添加大约一微升的润滑脂，以防止胶水粘在该位置。使用卷起的组织在胸腔周围、胶带和胸腔上涂上紫外线胶水，并用紫外线治愈胶水约五秒钟。

小心地用实验室组织去除任何油脂和未粘附的胶水，并在头部顶部加入大约一毫升盐水。使用钳子将任何气泡推到一边，并通过在盐水上放置盖片并转动支架检查前侧的盐水来检查泄漏情况。如果观察到盐水，取出盐水，用更多的胶水或更多的油脂修复孔。

要解剖头部，请选择最高的放大倍数，并使用锐化的非常细的钳子在颈部两侧的中央暗角质三角形底部进行两次切割。切开暗三角形，取出角质层的这一部分。肌肉16和食道应该通过这个洞可见，并有节奏地移动。

使用非常精细的钳子小心地捏这个区域的顶部，以切断肌肉16，而不会刺穿食道。如果有节奏的运动停止肌肉16很可能被移除。当肌肉从深三角区域的中间边缘开始切除时，像一把剪刀一样使用钳子小心地切开并取出小块剩余的角质层。

然后使用钳子抓住并缓慢而稳定地一次拉开一个气囊。在这段视频中，钙探针被表达在这两个果蝇大脑的所有神经元中。并提出了一股气味。

在这个实验中，钙传感器表达仅限于多巴明和血清素神经元。注意大脑中强同步活动与苍蝇行走行为之间的紧密相关性，说明在特定行为期间如何观察整个大脑。使用原理组件分析和独立组件分析，可以提取不同颜色突出显示的不同功能区域。

功能区域的形状和本地化允许将区域映射为解剖模板。识别大脑区域，在某些情况下，神经元类型。一旦与适当的解剖模板荧光值对齐，就可以在特定的解剖大脑区域内进行定量分析。

例如，在本分析中，我们可以观察到，所有区域在行走过程中都比在梳妆打扮时更活跃。要有耐心。学习这种心脏解剖技术是很困难的。

在我的实验室里，人们平均需要三到四个月的时间才能掌握它，并得到他们的第一个有用的准备。按照这个协议，我们可以使用荧光显微镜记录大规模的大脑活动。特别指出了光场显微镜等快速方法。