يسمح بروتوكولنا بتصوير دماغ الذبابة بأكمله أثناء السلوك ، وهو أمر مهم لفهم كيفية تفاعل الخلايا العصبية في مناطق الدماغ المختلفة لتشكيل السلوك. على عكس البروتوكولات المنشورة الأخرى ، تم تطوير هذا خصيصا للوصول إلى الدماغ بأكمله بينما تتصرف الذبابة وتستشعرها رائحة أو طعم أو تحفيز بصري. لإنشاء فتحة رأس.
بعد طباعة الحامل بطابعة ثلاثية الأبعاد، ضع قطعة من الشريط اللاصق بشكل مستطيل على سطح مستو تحت مجهر ستيريو. وقطع ما يقرب من خمسة ملليمترات في قطعة سنتيمتر واحد. استخدام اثنين من مشرط ثابتة معا في موازاة لقطع فتحة 400 في 400 ميكرومتر المقبل في منتصف الجانب الأطول من الشريط، ووضع الشريط على الجانب تملق من الحفرة في الجزء السفلي من حامل.
استخدام ملقط لدفع الشريط ما يقرب من 500 ميكرومتر حول الحفرة. واستخدام طلاء الأظافر الأسود لتغطية الجزء العلوي من الشريط وحامل. بعد السماح طلاء الأظافر الجافة لمدة ساعة على الأقل استخدام الأنسجة المدرفلة لإضافة ما يقرب من ميكرولتر واحد من الشحوم إلى فتحة الرأس.
لإعداد فتحة الجسم، وقطع قطعة سنتيمترين تقريبا من الشريط واسعة إلى قطعتين وقطع شرائح 1.5 ملليمتر واسعة. ثم قطع الكتف العميق 0.3 ملليمتر وفتحة الجسم وتأكد من أن الشريط يناسب حامل. لإصلاح ذبابة في حامل، أولا وضع حاوية ضحلة مع الجليد تحت المجهر تشريح، ووضع حامل رأسا على عقب على قطعة من الأنسجة المختبرية وضعت على الجليد.
يستنشق ذبابة فاكهة أنثى عمرها يوم إلى أربعة أيام من خسيسها ، وتفجر الذبابة على الجليد غير المذاب. عندما تتوقف الذبابة عن الحركة استخدم ملقط Dell لفهم الذبابة عند قاعدة الأجنحة ، وانزلاق الذبابة إلى الحامل مع الرقبة داخل الفتحة. يجب وضع العينين بالتساوي على جانبي الفتحة.
إذا لزم الأمر، إضافة ميكرولتر واحد من الشحوم إلى أعلى الرأس لمنع الغراء من الوصول إلى الجزء الخلفي من الرأس. ثم تغطية الجسم مع الأنسجة وبعض الجليد للتأكد من أن الذبابة لا تتحرك. لتأمين الرأس، ضعه بزاوية 20 درجة تقريبا من منظر خلفي بالكامل.
واستخدام الأنسجة ملفوفة لتطبيق الغراء الأشعة فوق البنفسجية حول الرأس مع تجنب تسخين المنطقة الحسية ذات الاهتمام. لتجارب الذوق، استخدم ملقط لسحب خرطوم وإضافة الغراء في قاعدة خرطوم لمنع الحركة. إذا لم يتم التخطيط لتجربة الذوق دفع والغراء خرطوم في الرأس.
علاج الغراء مع ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة خمس ثوان، واستخدام الأنسجة ملفوفة لتنظيف بعناية المناطق المحيطة الرأس، لإزالة أي الغراء السائل المتبقية التي يمكن أن تلتصق الساقين والأبواب التربة، والمناطق الحسية. ثم استخدم شريطا رفيعا من الشريط أو منديلا لتحريك الساقين إلى الأمام عند الضرورة. لوضع الجسم، وإزالة حاوية الثلج وتحويل حامل حولها.
إزالة المياه حول الذبابة والتصرف بسرعة قبل أن تتعافى الذبابة من وضع التخدير شريط فتحة الجسم فوق الحفرة ودفع بلطف جسم الذبابة إلى أسفل، مع الحرص على عدم تجاوز الرقبة. تغطية أي ثقوب كبيرة المتبقية مع الشريط وإضافة ما يقرب من ميكرولتر واحد من الشحوم إلى الجزء الخلفي من الرأس، لمنع الغراء من الالتصاق في هذا الموقع. استخدام الأنسجة ملفوفة لطلاء الغراء الأشعة فوق البنفسجية حول الصدر وعلى رأس الشريط والصدر، وعلاج الغراء مع ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة خمس ثوان تقريبا.
إزالة بعناية أي الشحوم والغراء غير المفرغ مع الأنسجة المختبرية وإضافة ما يقرب من ملليلتر واحد من المالحة إلى أعلى الرأس. استخدام ملقط لدفع جانبا أي فقاعات الهواء والتحقق من وجود تسرب عن طريق وضع زلة غطاء على المالحة وتحول حامل حولها للتحقق من وجود المالحة على الجانب الأمامي. إذا لوحظ الملحية، وإزالة المالحة وإصلاح الثقب مع المزيد من الغراء أو المزيد من الشحوم.
لتشريح الرأس حدد أعلى تكبير واستخدام ملقط دقيق جدا شحذ لجعل اثنين من التخفيضات في قاعدة مثلث لطيف الظلام المركزي على كل جانب من الرقبة. قطع حول المثلث المظلم، وإزالة هذا الجزء من لطيف. يجب أن تكون العضلات 16 والمريء مرئية من خلال هذا الثقب وتتحرك بشكل إيقاعي.
استخدام ملقط غرامة جدا لقرصة بعناية الجزء العلوي من هذه المنطقة لقطع العضلات 16 دون ثقب المريء. إذا كانت الحركة الإيقاعية توقف العضلات 16 من المرجح إزالتها. عندما يتم استئصال العضلات بدءا من الحافة المتوسطة لمنطقة المثلث المظلم، استخدم ملقط مثل زوج من مقص لقطع بعناية وإزالة لطيف المتبقية في قطع صغيرة.
ثم استخدم ملقط لفهم وسحب ببطء وثبات بعيدا كيس الهواء واحد في وقت واحد. في هذا الفيديو تم التعبير عن مسبار الكالسيوم في جميع الخلايا العصبية من هذين الدماغين ذبابة الفاكهة. وقدمت نفخة من الرائحة.
في هذه التجربة، اقتصر تعبير مستشعر الكالسيوم على الخلايا العصبية الدوبامينية والسيروتونية. لاحظ الارتباط الضيق بين النشاط المتزامن القوي فوق الدماغ وسلوك المشي الذبابي الذي يوضح كيف يمكن ملاحظة الدماغ بأكمله أثناء سلوك معين. يمكن استخراج باستخدام تحليل المكون الأساسي وتحليل المكونات المستقلة المناطق الوظيفية المختلفة التي تم تمييزها بألوان مختلفة.
يسمح شكل المناطق الوظيفية وتوطينها بتعيين المناطق إلى قوالب تشريحية. لتحديد مناطق الدماغ وفي بعض الحالات، أنواع الخلايا العصبية. مرة واحدة تتماشى مع القيم الفلورية القالب التشريحي المناسب يمكن أن يكون متوسط داخل مناطق معينة الدماغ التشريحية للتحليل الكمي.
على سبيل المثال ، في هذا التحليل يمكننا أن نلاحظ أن جميع المناطق أكثر نشاطا أثناء المشي مما كانت عليه أثناء الاستمالة. اصطبر. تعلم هذه التقنية تشريح القلب من الصعب.
في مختبري، يحتاج الناس في المتوسط من ثلاثة إلى أربعة أشهر قبل أن يتقنوه ويحصلوا على أول تحضيرات مفيدة. بعد هذا البروتوكول يمكننا تسجيل نشاط الدماغ على نطاق واسع باستخدام المجهر الفلوري. ويشار بشكل خاص إلى الطرق السريعة مثل المجهر الميداني الخفيف.
