该方案是内毒素血症的稳健且可重复的模型,其中可以重复评估生理和分子参数。这种方法可能有助于回答脓毒症研究中的问题。虽然我们的模型不能取代动物实验,但它通过连续镇静来完善败血症模型,并通过重复采样减少动物数量。
初学者可能难以插入动脉和静脉导管,但只需有限的培训即可掌握这些技术。整个实验设置的可视化有助于研究人员设置或调整他们的模型,以更紧密地模拟ICU上的情况。首先将麻醉动物转移到加热垫上。
将体温保持在36.5至37摄氏度之间。确保动物通过鼻锥提供氧气来自主呼吸。在安装气管切开术和动脉静脉导管之前,通过没有脚趾夹反射来确认麻醉水平。
使用软膏来保护眼睛。准备无菌手术器械和导管,以及压力和氧饱和度监测,以获得足够的氧合。在大鼠的近端尾巴上涂抹止血带以方便静脉通路,并用酒精对尾巴进行三次消毒。
将 26 号静脉导管引入两条侧尾静脉之一,避免空气喷射。放置静脉导管后解开止血带,并用胶带将静脉导管固定到位。将带三通旋塞阀的注射泵连接到静脉通路,以实现连续的液体和药物应用。
通过剃除动物的前颈部区域开始气管切开术,然后用聚维酮碘溶液对剃光的皮肤进行三次消毒。使用10号手术刀刀片进行两厘米的纵向切口。用2-0条丝线缩回皮肤。
然后钝地准备喉部和气管用手术剪刀打开。将无菌气管套管插入气管,小心不要穿透太深,以避免单侧通气。使用 2-O 丝缝线将套管固定到位,然后将套管连接到呼吸机以进行压力或容量控制通气。
在设置实验之前,定义补液方案、血管收缩剂应用方案和流产标准。用聚维酮碘溶液对大鼠尾部进行消毒三次,然后用手术刀在腹侧纵向切开皮肤圈一厘米,注意不要切得太深,以免尾动脉受伤。使用手术显微镜仔细暴露动脉。
用手术微剪刀切开动脉周围的筋膜。然后通过进行近端6-0丝缝合来连接动脉的远端部分,但不要收紧丝。将26号导管引入远端和近端丝缝之间的动脉,然后收紧近端丝缝线以将导管固定到位。
将导管连接到压力传感器,以提供连续的动脉压测量。此外,在连接到压力传感器的导管和26号导管之间放置一个三通旋塞阀,以进行动脉血液采样。动物达到稳定状态后,通过注射LPS诱导脓毒症并采集血液样本。
用Ringer的溶液以一到四的比例补充血液样品中的液体损失,始终避免空气注射,以防止空气栓塞。在有或没有LPS刺激的动物中,平均动脉压保持稳定。LPS处理的动物出现脓毒症的特征,例如负碱过量。
LPS处理的动物也发展出强烈的炎症反应,其通过血浆细胞因子测量,例如化学牵拉肽蛋白-1,单核细胞化学吸引蛋白-1和白细胞介素-6。当尝试此方案时,请记住预定义液体和血管加压药方案以及定义终止标准,以获得可靠且可重复的研究数据。该方案可适用于其他脓毒症模型。
因此,研究问题以最合适的方法回答,并遵循减少,完善,取代动物福利的原则。