Bu protokol, fizyolojik ve moleküler parametrelerin tekrar tekrar değerlendirilebildiği sağlam ve tekrarlanabilir bir endotoksemi modelidir. Bu yaklaşım, sepsis araştırmalarındaki soruları cevaplamaya yardımcı olabilir. Modelimiz hayvan deneylerinin yerini almamakla birlikte, sürekli sedasyon yoluyla sepsis modellerini rafine eder ve tekrarlanan örnekleme yoluyla hayvan sayısını azaltır.
Yeni başlayanlar arteriyel ve venöz kateterlerin yerleştirilmesiyle mücadele edebilir, ancak bu tekniklerde ustalaşmak için sadece sınırlı eğitim gereklidir. Tüm deney düzeneğinin görselleştirilmesi, araştırmacıların YBÜ'deki bir durumu daha yakından taklit etmek için modellerini kurmalarını veya uyarlamalarını kolaylaştırır. Anestezi uygulanan hayvanı bir ısıtma matına aktararak başlayın.
Vücut ısısını 36.5 ila 37 santigrat derece arasında tutmak. Bir burun konisi ile oksijen sağlayarak hayvanın kendiliğinden nefes aldığından emin olun. Trakeostomi ve arteriyel ve venöz kateterlerin yerleştirilmesinden önce ayak parmağı sıkışma refleksinin yokluğu ile anestezi seviyesini doğrulayın.
Gözleri korumak için bir merhem kullanın. Yeterli oksijenasyon için basınç ve oksijen doygunluğu izleme ile birlikte steril cerrahi aletler ve kateterler hazırlayın. Venöz erişimi kolaylaştırmak ve kuyruğu alkolle üç kez dezenfekte etmek için sıçanın proksimal kuyruğuna bir turnike uygulayın.
Hava enjeksiyonundan kaçınarak iki lateral kuyruk damarından birine 26 gauge intravenöz kateter sürün. İntravenöz kateteri yerleştirdikten sonra turnikeyi çözün ve intravenöz kateteri yapışkan bantla yerine sabitleyin. Sürekli sıvı ve ilaç uygulaması için üç tıkayıcı pompaları intravenöz erişime bağlayın.
Trakeostomiye hayvanın ön boyun bölgesini tıraş ederek başlayın ve ardından traş edilen cildi povidon iyot çözeltisi ile üç kez dezenfekte edin. 10 numaralı neşter bıçağı kullanarak iki santimetre boyuna bir kesi gerçekleştirin. Cildi 2-0 ipek dikişle geri çekin.
Daha sonra cerrahi makasla açılacak gırtlak ve trakeayı açıkça hazırladı. Tek taraflı ventilasyonu önlemek için çok derine nüfuz etmemeye dikkat ederek trakeaya steril bir trakea kanülü yerleştirin. 2-O ipek sütür kullanarak kanülü yerine sabitleyin ve ardından basınç veya hacim kontrollü havalandırma için kanülü bir vantilatöre bağlayın.
Deneyi kurmadan önce sıvı replasman protokollerini, vazokonstriktör uygulama protokollerini ve kürtaj kriterlerini tanımlayın. Sıçan kuyruğunu povidon iyot çözeltisi ile üç kez dezenfekte edin ve daha sonra kuyruk arterinin yaralanmasını önlemek için çok derin kesmemeye dikkat ederek cilt çemberini ventral tarafta bir santimetre uzunlamasına bir neşter kullanarak kesin. Arteri dikkatlice ortaya çıkarmak için cerrahi bir mikroskop kullanın.
Arteri çevreleyen fasyayı cerrahi mikro makasla kesin. Daha sonra proksimal 6-0 ipek dikiş yaparak arterin distal kısmını yağlayın, ancak ipeği sıkmayın. Distal ve proksimal ipek sütür arasındaki artere 26 gauge'lik bir kateter yerleştirin ve ardından kateteri yerine sabitlemek için proksimal ipek sütürü sıkın.
Sürekli arteriyel basınç ölçümü sağlamak için kateteri bir basınç dönüştürücüsüne bağlayın. Ek olarak, basınç dönüştürücüsüne bağlı kateter ile arteriyel kan örneklemesi için 26 gauge kateter arasına üç yönlü bir stopcock yerleştirin. Hayvan sabit bir duruma ulaştıktan sonra, LPS enjekte ederek sepsis indüklenir ve kan örnekleri toplanır.
Kan örneklerinden sıvı kaybını Ringer'ın çözeltisi ile bir ila dört oranında değiştirin, hava embolisini önlemek için her zaman hava enjeksiyonundan kaçının. Ortalama arteriyel basınç, LPS stimülasyonu olan ve olmayan hayvanlarda sabit kalır. LPS ile tedavi edilen hayvanlar, negatif baz fazlalığı gibi sepsis özellikleri geliştirir.
LPS ile tedavi edilen hayvanlar ayrıca, kemoattractant protein-1, monosit kemoattractant protein-1 ve interlökin-6 gibi plazma sitokinleri ile ölçülen güçlü bir enflamatuar reaksiyon geliştirdi. Bu protokolü denerken, sıvı ve vazopresör rejimlerini önceden tanımlamayı ve katı ve tekrarlanabilir araştırma verileri elde etmek için sonlandırma kriterlerini tanımlamayı unutmayın. Bu protokol diğer sepsis modellerine uyarlanabilir.
Böylece bir araştırma sorusu en uygun yaklaşımla ve hayvan refahının azaltılması, rafine edilmesi, değiştirilmesi ilkelerine uygun olarak cevaplanır.
