이 프로토콜은 생리적 및 분자 파라미터가 반복적으로 평가될 수 있는 내독소혈증의 강력하고 재현 가능한 모델이다. 이 접근법은 패혈증 연구의 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 우리의 모델은 동물 실험을 대체하지는 않지만 지속적인 진정을 통해 패혈증 모델을 정제하고 반복적 인 샘플링을 통해 동물의 수를 줄입니다.
초보자는 동맥 및 정맥 카테터의 삽입으로 어려움을 겪을 수 있지만 이러한 기술을 습득하려면 제한된 교육 만 필요합니다. 전체 실험 설정의 시각화는 연구자가 ICU의 상황을보다 밀접하게 모방하기 위해 모델을 설정하거나 적응할 수있게 해줍니다. 마취 된 동물을 가열 매트로 옮기는 것으로 시작하십시오.
체온을 섭씨 36.5도에서 37도 사이로 유지하십시오. 동물이 코 원뿔에 산소를 공급하여 자발적으로 호흡하고 있는지 확인하십시오. 기관 절제술과 동맥 및 정맥 카테터를 설치하기 전에 발가락 핀치 반사의 부재로 마취의 수준을 확인하십시오.
눈을 보호하기 위해 연고를 사용하십시오. 충분한 산소화를 위해 압력 및 산소 포화도 모니터링과 함께 멸균 수술 도구 및 카테터를 준비하십시오. 쥐의 근위 꼬리에 지혈대를 바르면 정맥 접근을 용이하게하고 꼬리를 알코올로 세 번 소독하십시오.
공기 주입을 피하면서 두 개의 측면 꼬리 정맥 중 하나에 26 게이지 정맥 내 카테터를 도입하십시오. 정맥 카테터를 놓은 후 지혈대를 풀고 접착 테이프로 정맥 내 카테터를 제자리에 고정시킵니다. 주사기 펌프를 세 방향 스토콕과 정맥 내 접근에 연결하여 지속적인 유체 및 약물 적용을 수행합니다.
동물의 앞쪽 목 부위를 면도하여 기관 절제술을 시작한 다음 포비돈 요오드 용액으로 면도 된 피부를 세 번 소독하십시오. 메스 블레이드 번호 10을 사용하여 두 센티미터 세로 절개를 수행합니다. 2-0 실크 봉합사로 피부를 수축시킵니다.
그런 다음 후두와 기관을 외과 용 가위로 열 수 있도록 무뚝뚝하게 준비했습니다. 멸균 기관 캐뉼라를 기관에 삽입하여 일방적 인 환기를 피하기 위해 너무 깊이 침투하지 않도록주의하십시오. 2-O 실크 봉합사를 사용하여 캐뉼라를 제자리에 고정시킨 다음 캐뉼라를 인공 호흡기에 연결하여 압력 또는 볼륨 조절 환기를 수행하십시오.
실험을 시작하기 전에 유체 대체 프로토콜, 혈관 수축기 적용 프로토콜 및 낙태 기준을 정의하십시오. 포비돈 요오드 용액으로 쥐 꼬리를 세 번 소독 한 다음 메스를 사용하여 복부 쪽에서 피부 원을 세로 한 센티미터 정도 자르고 꼬리 동맥의 부상을 피하기 위해 너무 깊게 자르지 않도록주의하십시오. 수술 현미경을 사용하여 동맥을 조심스럽게 노출시킵니다.
외과 용 마이크로 가위로 동맥 주위의 근막을 자르십시오. 그런 다음 근위 6-0 실크 봉합사를 수행하여 동맥의 원위 부분을 절제하지만 실크를 조이지 마십시오. 원위 및 근위 실크 봉합사 사이의 동맥에 26 게이지 카테터를 도입 한 다음 근위 실크 봉합사를 조여서 카테터를 제자리에 고정시킵니다.
카테터를 압력 변환기에 연결하여 지속적인 동맥압 측정을 제공합니다. 또한 압력 변환기에 연결된 카테터와 동맥 혈액 샘플링을 위한 26게이지 카테터 사이에 세 방향 스톱콕을 놓습니다. 동물이 정상 상태에 도달한 후, LPS를 주입하여 패혈증을 유도하고 혈액 샘플을 수집한다.
혈액 샘플의 체액 손실을 Ringer의 용액으로 하나 대 네 개의 비율로 교체하여 공기 색전증을 방지하기 위해 항상 공기 주입을 피하십시오. 평균 동맥압은 LPS 자극 유무에 관계없이 동물에서 안정적으로 유지됩니다. LPS 처리 동물은 음성 염기 과잉과 같은 패혈증의 특성을 발달시킨다.
LPS 처리된 동물은 또한 강한 염증 반응을 전개시켰으며, 이는 화학유인제 단백질-1, 단핵구 화학유인제 단백질-1, 및 인터루킨-6과 같은 혈장 사이토카인에 의해 측정되었다. 이 프로토콜을 시도 할 때 유체 및 혈관 압착기 요법을 미리 정의하고 견고하고 재현 가능한 연구 데이터를 얻기 위해 종료 기준을 정의하는 것을 잊지 마십시오. 이 프로토콜은 다른 패혈증 모델에 적응될 수 있다.
따라서 연구 질문은 가장 적합한 접근 방식으로 그리고 동물 복지의 감소, 개선, 대체의 원칙에 따라 대답됩니다.
