نموذج السموم الداخلية الموجه نحو وحدة العناية المركزة القابلة للتكرار في الفئران

هذا البروتوكول هو نموذج قوي وقابل للتكرار من تسمم الدم الداخلي حيث يمكن تقييم المعلمات الفسيولوجية والجزيئية بشكل متكرر. قد يساعد هذا النهج في الإجابة على الأسئلة في أبحاث الإنتان. في حين أن نموذجنا لا يحل محل التجارب على الحيوانات ، إلا أنه يحسن نماذج الإنتان من خلال التخدير المستمر ويقلل من عدد الحيوانات من خلال أخذ العينات المتكررة.

قد يكافح المبتدئون مع إدخال القسطرة الشريانية والوريدية ، ولكن لا يلزم سوى تدريب محدود لإتقان هذه التقنيات. يسهل تصور الإعداد التجريبي بأكمله على الباحثين إعداد أو تكييف نماذجهم لمحاكاة الوضع في وحدة العناية المركزة بشكل أوثق. ابدأ بنقل الحيوان المخدر إلى حصيرة التدفئة.

الحفاظ على درجة حرارة الجسم بين 36.5 و 37 درجة مئوية. تأكد من أن الحيوان يتنفس تلقائيا عن طريق توفير الأكسجين مع مخروط الأنف. تأكد من مستوى التخدير من خلال عدم وجود منعكس قرصة إصبع القدم قبل تركيب فغر القصبة الهوائية والقسطرة الشريانية والوريدية.

استخدم مرهما لحماية العينين. إعداد الأدوات الجراحية المعقمة والقسطرة جنبا إلى جنب مع مراقبة الضغط وتشبع الأكسجين للحصول على كمية كافية من الأكسجين. ضع عاصبة في ذيل الفئران القريب لتسهيل الوصول الوريدي وتطهير الذيل ثلاث مرات بالكحول.

أدخل قسطرة وريدية قياس 26 في أحد عروق الذيل الجانبية لتجنب حقن الهواء. فك العاصبة بعد وضع القسطرة الوريدية وإصلاح القسطرة الوريدية في مكانها بشريط لاصق. قم بتوصيل مضخات المحاقن بأجهزة إيقاف ثلاثية الاتجاهات بالوصول عن طريق الوريد لتطبيق السوائل والأدوية بشكل مستمر.

ابدأ فغر القصبة الهوائية عن طريق حلق منطقة الرقبة الأمامية للحيوان ، ثم قم بتطهير الجلد الحليق ثلاث مرات بمحلول يود البوفيدون. قم بإجراء شق طولي بسنتيمترين باستخدام شفرة مشرط رقم 10. سحب الجلد مع 2-0 خيوط الحرير.

ثم أعد بصراحة الحنجرة والقصبة الهوائية لفتحها بمقص جراحي. أدخل قنية قصبة معقمة في القصبة الهوائية ، مع الحرص على عدم الاختراق بعمق كبير لتجنب التهوية من جانب واحد. ثبت القنية في مكانها باستخدام خياطة حريرية 2-O ثم قم بتوصيل القنية بجهاز تهوية للضغط أو التهوية التي يتم التحكم في حجمها.

حدد بروتوكولات استبدال السوائل، وبروتوكولات تطبيق مضيق للأوعية، ومعايير الإجهاض قبل إعداد التجربة. قم بتطهير ذيل الفئران ثلاث مرات بمحلول يود البوفيدون ثم قم بقطع دائرة الجلد بمقدار سنتيمتر واحد طوليا على الجانب البطني باستخدام مشرط ، مع الحرص على عدم القطع بعمق لتجنب إصابة شريان الذيل. استخدم المجهر الجراحي لكشف الشريان بعناية.

قطع اللفافة المحيطة بالشريان باستخدام مقص جراحي مجهري. ثم قم بربط الجزء البعيد من الشريان عن طريق إجراء خياطة الحرير القريبة 6-0 ، ولكن لا تشد الحرير. أدخل قسطرة قياس 26 في الشريان بين خياطة الحرير البعيدة والقريبة ، ثم شد خياطة الحرير القريبة لتثبيت القسطرة في مكانها.

قم بتوصيل القسطرة بمحول ضغط لتوفير قياس مستمر للضغط الشرياني. بالإضافة إلى ذلك، ضع سدادة ثلاثية الاتجاهات بين القسطرة المتصلة بمحول الضغط والقسطرة ذات المقياس 26 لأخذ عينات الدم الشرياني. بعد أن يصل الحيوان إلى حالة مستقرة ، يحدث الإنتان عن طريق حقن LPS وجمع عينات الدم.

استبدل فقدان السوائل من عينات الدم بمحلول رينجر بنسبة واحد إلى أربعة ، وتجنب حقن الهواء في جميع الأوقات من أجل منع انسداد الهواء. يبقى متوسط الضغط الشرياني مستقرا في الحيوانات مع وبدون تحفيز LPS. الحيوانات المعالجة ب LPS تطور خصائص الإنتان ، مثل فائض القاعدة السلبي.

طورت الحيوانات المعالجة ب LPS أيضا تفاعلا التهابيا قويا ، تم قياسه بواسطة سيتوكينات البلازما ، مثل البروتين الجاذب الكيميائي -1 ، والبروتين الجاذب الكيميائي أحادي الخلية -1 ، والإنترلوكين-6. عند محاولة هذا البروتوكول ، تذكر أن تحدد مسبقا أنظمة السوائل وضاغط الأوعية بالإضافة إلى تحديد معايير الإنهاء من أجل الحصول على بيانات بحثية صلبة وقابلة للتكرار. يمكن تكييف هذا البروتوكول مع نماذج الإنتان الأخرى.

لذلك يتم الإجابة على سؤال البحث بالنهج الأنسب ووفقا لمبادئ تقليل وصقل واستبدال رعاية الحيوان.