Este protocolo é um modelo robusto e reprodutível de endotoxemia no qual parâmetros fisiológicos e moleculares podem ser avaliados repetidamente. Essa abordagem pode ajudar a responder perguntas em pesquisas sobre sepse. Embora nosso modelo não substitua experimentos com animais, ele refina modelos de sepse através da sedação contínua e reduz o número de animais através de amostragem repetida.
Os iniciantes podem lutar com a inserção de cateteres arteriais e venosos, mas apenas treinamento limitado é necessário para dominar essas técnicas. A visualização de toda a configuração experimental facilita que os pesquisadores configurem ou adaptem seus modelos para imitar mais de perto uma situação na UTI. Comece transferindo o animal anestesiado para um tapete de aquecimento.
Mantendo a temperatura corporal entre 36,5 e 37 graus Celsius. Certifique-se de que o animal está respirando espontaneamente fornecendo oxigênio com um cone de nariz. Confirme o nível de anestesia pela ausência do reflexo do dedo do dedo do dedo antes da instalação de traqueostomia e cateteres arteriais e venosos.
Use uma pomada para proteger os olhos. Prepare instrumentos cirúrgicos estéreis e cateteres, juntamente com o monitoramento de pressão e saturação de oxigênio para oxigenação suficiente. Aplique um torniquete na cauda proximal do rato para facilitar o acesso venoso e desinfetar a cauda três vezes com álcool.
Introduza um cateter intravenoso de 26 bitolas em uma das duas veias laterais da cauda evitando a injeção de ar. Desamarre o torniquete depois de colocar o cateter intravenoso e fixar o cateter intravenoso no lugar com fita adesiva. Conecte bombas de seringa com torneiras de três vias ao acesso intravenoso para aplicação contínua de fluidos e medicamentos.
Comece a traqueostomia raspando a área anterior do pescoço do animal e, em seguida, desinfete a pele raspada três vezes com solução de iodo povidone. Realize uma incisão longitudinal de dois centímetros usando uma lâmina de bisturi número 10. Retraia a pele com suturas de seda 2-0.
Em seguida, preparou sem rodeios a laringe e a traqueia para abrir com uma tesoura cirúrgica. Insira uma cânula traqueal estéril na traqueia, tomando cuidado para não penetrar muito profundamente para evitar ventilação unilateral. Fixar a cânula no lugar usando uma sutura de seda 2-O e, em seguida, conectar a cânula a um ventilador para pressão ou ventilação controlada por volume.
Defina protocolos de substituição de fluidos, protocolos de aplicação vasoconstritores e critérios de aborto antes de configurar o experimento. Desinfete a cauda do rato três vezes com solução de iodo povidone e, em seguida, corte o círculo de pele um centímetro longitudinalmente no lado ventral usando um bisturi, tomando cuidado para não cortar muito profundamente para evitar uma lesão da artéria traseira. Use um microscópio cirúrgico para expor cuidadosamente a artéria.
Corte a fáscia ao redor da artéria com micro tesoura cirúrgica. Em seguida, ligar a parte distal da artéria realizando sutura de seda proximal 6-0, mas não aperte a seda. Introduza um cateter de 26 bitolas na artéria entre a sutura de seda distal e proximal e, em seguida, aperte a sutura de seda proximal para fixar o cateter no lugar.
Conecte o cateter a um transdutor de pressão para fornecer medição contínua da pressão arterial. Além disso, coloque uma torneira de três vias entre o cateter conectado ao transdutor de pressão e o cateter de 26 medidores para amostragem arterial. Após o animal atingir um estado estável, induziu a sepse injetando LPS e coletando amostras de sangue.
Substitua a perda de fluido das amostras de sangue pela solução de Ringer em uma proporção de um a quatro, evitando a injeção de ar o tempo todo, a fim de evitar a embolia do ar. A pressão arterial média permanece estável em animais com e sem estimulação de LPS. Animais tratados com LPS desenvolvem características de sepse, como o excesso de base negativa.
Os animais tratados com LPS também desenvolveram uma forte reação inflamatória, medida por citocinas plasmáticas, como quimioattractant protein-1, proteína quimiofos de monociclita-1 e interleucina-6. Ao tentar este protocolo, lembre-se de pré-predefine regimes fluidos e vasopressores, bem como definir critérios de rescisão a fim de obter dados de pesquisa sólidos e reprodutíveis. Este protocolo pode ser adaptado a outros modelos de sepse.
Assim, uma pergunta de pesquisa é respondida com a abordagem mais adequada e de acordo com os princípios de redução, refinanciamento, substituição do bem-estar animal.
