通过炎症性乳腺癌细胞的尾静脉注射模拟脑转移

我们利用尾静脉方法在小鼠模型中使用来自炎症性乳腺癌（IBC，一种高度侵袭性的原发性乳腺癌）患者的细胞系产生脑转移。小鼠模型中脑转移的产生通常涉及心内或颈内动脉注射。然而，尾静脉方法比这些技术更具优势，因为它更好地模仿了脑转移定植的步骤，并且相对容易执行。

医生Xiaoding Hu和Emilly Villodre都是我实验室的讲师，他们将演示该程序。为了在肿瘤细胞注射后8至10周通过GFP成像检测脑转移，用70%乙醇消毒小鼠并去除头部和耳朵上的皮毛。切开颈部的颈部区域。

切除并切除头骨以收获大脑。将大脑放入组织盒中，并将盒式磁带放入冷DPBS容器中不超过一小时。对于立体显微镜成像，将大脑转移到配备紫外线的立体显微镜下的100厘米纸巾皿盖中，并选择0.5倍物镜以可视化整个大脑。

按下实时取景并在大脑处于腹侧位置时聚焦视图。在软件和显微镜中为细胞中的荧光标记物选择合适的滤光片，然后拍照。在不移动样品的情况下，切换到明场成像并选择明场滤光片。

拍照。然后如前所述，在背部位置对大脑进行成像。要分析全脑图像，首先将图像文件从TIFF转换为JPEG，以便可以使用任何没有相关软件的计算机打开它们。

接下来，打开一对明场和荧光图像并选择文件和合并通道。选择适当的组件，单击“确定”，然后保存合并的图像。要量化荧光图像中的脑肿瘤区域，请选择自动选择。

将箭头移动到 GFP 位置区域，然后单击以自动创建选区。然后再次单击以确认选择。将显示所有测量值。

如果可以观察到多个GFP正区域，则对后续区域重复测量。脑转移性病变最早可在注射后八周通过荧光素酶成像和立体荧光显微镜检查检测到。成像后，可以对部分脑转移瘤进行福尔马林固定和处理，用于苏木精和伊红染色，以验证是否存在脑转移病变，并进行免疫组织化学染色以检测感兴趣的特定蛋白质标志物。

尝试此协议时，重要的是通过将细胞保持在冰上不超过一小时来保持细胞活力，并避免细胞悬液中的气泡以防止栓子形成和小鼠死亡。尾静脉注射后，我们通过荧光素酶成像监测脑转移的生长和进展。安乐死后，立体荧光显微镜检查和组织学检查证实转移病变。