מידול גרורות במוח באמצעות הזרקת ורידים בזנב של תאי סרטן שד דלקתיים

השתמשנו בשיטת וריד הזנב כדי ליצור גרורות במוח במודלים של עכברים באמצעות שורות תאים שמקורן בחולות עם סרטן שד דלקתי, או IBC, צורה אגרסיבית מאוד של סרטן שד ראשוני. יצירת גרורות במוח במודלים של עכברים כוללת בדרך כלל זריקות עורקי תוך לבביות או תוך קרוטידיות. עם זאת, שיטת וריד הזנב מציעה יתרון על פני טכניקות אלה מכיוון שהיא מחקה טוב יותר את השלבים של התיישבות גרורות במוח, והיא פשוטה יחסית לביצוע.

הרופאים שיאודינג הו ואמילי וילודר, שניהם מדריכים במעבדה שלי, ידגימו את ההליך. כדי לזהות גרורות במוח על ידי הדמיית GFP שמונה עד 10 שבועות לאחר הזרקת תאי גידול, יש לחטא את העכבר באתנול 70% ולהסיר את הפרווה מהראש ומהאוזניים. חותכים את אזור צוואר הרחם של הצוואר.

הבלו והסר את הגולגולת כדי לאפשר למוח להיקצר. הכניסו את המוח לקלטת טישו והכניסו את הקלטת למיכל של DPBS קרים למשך לא יותר משעה. עבור הדמיה על ידי מיקרוסקופ סטריאו, להעביר את המוח לתוך מכסה צלחת רקמה 100 ס"מ תחת מיקרוסקופ סטריאו מצויד באור UV ובחר את המטרה 0.5x כדי לאפשר הדמיה של המוח כולו.

לחץ על תצוגה חיה ומקד את התצוגה בזמן שהמוח נמצא במצב הגחון. בחר את המסנן המתאים בתוכנה ובמיקרוסקופ לסמן הפלואורסצנטי בתאים, וצלם תמונה. מבלי להזיז את הדגימה, עבור להדמיית brightfield ובחר במסנן brightfield.

צלמו תמונה. לאחר מכן דמיינו את המוח במצב הגבי כפי שהודגם קודם לכן. כדי לנתח את כל תמונות המוח, המר תחילה את קבצי התמונה מ- TIFF ל- JPEG כך שניתן יהיה לפתוח אותם עם כל מחשב שאין לו את התוכנה המשויכת.

לאחר מכן, פתח זוג תמונות בהירות ופלורסנט ובחר קובץ ומיזוג ערוצים. בחר את הרכיבים המתאימים, לחץ על אישור ושמור את התמונה הממוזגת. לכימות אזור הגידול במוח בתמונה הפלואורסצנטית, בחרו בחירה אוטומטית.

הזיזו את החץ לאזור המיקום של GFP ולחצו ליצירת בחירה אוטומטית. לאחר מכן לחצו שוב כדי לאשר את הבחירה. כל המדידות יוצגו.

אם ניתן להבחין ביותר מאזור חיובי GFP אחד, חזור על המדידה עם האזור הבא. נגעים גרורתיים במוח יכולים להתגלות כבר שמונה שבועות לאחר ההזרקה על ידי הדמיית לוציפראז ומיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאופוני. לאחר ההדמיה, חלקים מהגרורות במוח יכולים להיות קבועים פורמלין ומעובדים עבור צביעת hematoxylin ו eosin כדי לאמת את נוכחותם של נגעים גרורות במוח, ועבור צביעה immunohistochemical כדי לזהות סמנים חלבוניים ספציפיים של עניין.

כאשר מנסים פרוטוקול זה, חשוב לשמור על כדאיות התא על ידי שמירה על התאים על קרח לא יותר משעה, ולמנוע בועות אוויר בתרחיף התא כדי למנוע היווצרות אמבולי ותמותת עכברים. לאחר הזרקת ורידים בזנב, אנו עוקבים אחר גידול גרורות במוח והתקדמות באמצעות הדמיית לוציפראז. לאחר המתת חסד, מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאופוני והיסטולוגיה אישרו נגעים גרורות.