单骨骼肌肉纤维解剖，用于全山神经肌肉结的免疫荧光和形态分析

解剖单骨骼肌纤维，用于全安装神经肌肉结的免疫荧光和形态分析。此视频将演示一个协议，以有效和安全地解剖EDL和鞋底肌肉与可重复的方法。此视频还将教如何获得全安装神经肌肉结点，目的是识别具有 3D 完整性的突触组件，以便进行准确的形态分析。

为了解剖肌肉，这些手术器械是必要的。要启动程序，将动物的腹部朝上放置。使用脚趾之间的手术刀片对后肢进行初始切口。

剥去皮肤，向上拉，直到右膝露出来。要找到 EDL，请按照脚肌腱到环状韧带。这个韧带绕两个肌腱。

用两个肌腱之间的 Uniband 剪刀切开韧带。通过抬起两个并看到哪一个使脚趾向上移动来识别 EDL 肌腱。用剪刀切肌腱。

当用生物钳子握住肌腱时，开始慢慢将EDL肌肉与其他后肢肌肉分离。在不造成损伤的情况下分离肌肉，可以通过对其他横向肌肉进行各种切口，以打开它们之间的路径，同时将肌肉从 EDL 肌腱的分裂部分保持和提升。要完全隔离肌肉，使用 Uniband 剪刀切割附着在鼠膝上的肌腱。

将解剖的肌肉浸入固定溶液中，并在摄氏四度下将其保留 24 小时。一般来说，有一个拉长的肌肉是有用的。为此，使用纸板和主食连接肌肉固定。

要隔离鞋底肌肉，翻转动物。通过皮肤，使用手术刀片切开钙化肌腱。在生物钳子和 Uniband 剪刀的帮助下，将胃内膜肌肉与骨骼分离，形成肌肉盖。

鞋底将在肌肉盖的内侧。它可以识别，因为它是红色和平坦的。用一对生物钳子，伸手和抬起位于上面胃内皮上方的鞋底肌腱。

用 Uniband 剪刀切肌腱。抬起整个肌肉，同时切割一些薄弱的附件点。最后，要完全释放鞋底肌肉，切开形成钙化肌腱的鞋底囊泡。

重复固定步骤，就像EDL肌肉一样。要使用这种方法，重要的是确保主食的肌腱，而不是肌肉。一旦24小时固定期过去，冲洗DPBS溶液中的肌肉，然后开始分离肌肉纤维。

为了隔离纤维，用一对生物钳轻轻握住一根肌腱。然后用另一对生物钳子，开始慢慢捏肌腱来分离肌肉纤维。要隔离纤维，慢慢向上拉向相反的肌肉肌腱。

在获得多个、小的、孤立的捆绑包之前，必须重复多次此操作。一旦分离成小的隔离捆绑包，小心地将其放置在预先处理的硅化幻灯片中。有必要保持所有的纤维有序，以便它们不重叠。

此时，纤维可以让空气干燥 24 小时。24小时后，开始免疫染色。要创建防水屏障，请使用 PAP 笔将预处理滑梯中孤立的肌肉纤维包围。

这是根据此处描述的协议可以获取的高分辨率共焦图像的示例。在左上角，显示突触后元素，在右上角显示突触前元素，而底部图像显示突触元件的构图，以说明用于形态分析的参数。第二张幻灯片显示突触前和后信号与 API 核污渍的合并。

转基因动物与非转基因动物神经肌肉结的差异是显而易见的。神经肌肉结的形态分析显示了转基因动物突触后信号的证据，并且似乎更紧凑，这主要是由于神经肌肉结总面积的减少。如这里所示，转基因动物的神经肌肉结突触前区域减少。

检测到的最小是发现具有抗磷化神经丝带信号的信号，例如在图像 B 中所示。最后一张图片显示了与全安装神经肌肉结状态相关的结果。利用覆盖指数，确定发现转基因神经肌肉结部分衰减。

此外，它可以确定磷酸化神经丝的覆盖范围和关系低于检测到非磷酸化神经丝时获得的覆盖范围和关系。拟议的协议允许从慢速和快速肌肉纤维获得高质量的神经肌肉结制剂。通过特定探头或抗体识别突触前和突触后神经肌肉结成分，然后通过共聚焦或超分辨率共聚焦显微镜成像，从而在微观尺度上进行形态学分析。