ניתוח של סיבי שריר שלד יחיד עבור ניתוחים אימונופלואורסצנטיים ומורפומטריים של צמתים עצביים-שריריים בהר שלם. וידאו זה ידגים פרוטוקול לנתח ביעילות ובבטחה את שרירי EDL וסוליוס בגישה חוזרת. וידאו זה גם ילמד כיצד להשיג צמתים עצביים שריריים שלם במטרה לזהות רכיבים סינפטיים עם שלמות תלת-ממדית כדי לאפשר ניתוח מורפומטרי מדויק.
כדי לנתח את השרירים, מכשירים כירורגיים אלה נדרשים. כדי להתחיל את ההליך, מניחים את החיה עם הבטן פונה כלפי מעלה. לבצע חתך ראשוני באמצעות להב כירורגי בין בהונות לכיוון הגפיים האחוריות.
לקלף את העור, מושך כלפי מעלה עד הברך הימנית נחשפת. כדי למצוא את EDL, בצע את גידים כף הרגל אל הרצועה הטבעתית. הרצועה הזו מקיפה שני גידים.
חותכים את הרצועה עם המספריים של יוניבנד בין שני הגידים. זהה את גיד ה- EDL על ידי הרמת שניהם ולראות איזה מהם גורם לבהונות לנוע כלפי מעלה. חותכים את הגיד עם מספריים.
תוך החזקת הגיד עם פינצטה ביולוגית, להתחיל לאט להפריד את שריר EDL משאר שרירי הגפיים האחוריות. הפרדת השריר מבלי לגרום נזק יכולה להיעשות על ידי ביצוע חתכים שונים על שאר השרירים לרוחב כדי לפתוח נתיב ביניהם, תוך החזקה והרמה של השריר מן החלק פיצול של גיד EDL. כדי לבודד לחלוטין את השריר, לחתוך את הגיד המחובר לברך החולדה באמצעות מספריים Uniband.
לטבול את השריר ניתח בתמיסה הקיבובע, ולהשאיר אותו במשך 24 שעות בארבע מעלות צלזיוס. באופן כללי, זה שימושי יש שריר מוארך. כדי לעשות זאת, להשתמש קרטון סיכות כדי לחבר את השריר לקיבעון.
כדי לבודד את שריר הסוליה, להפוך את החיה. דרך העור, לחתוך את הגיד קלצנלי באמצעות להב כירורגי. בעזרת פינצטה ביולוגית ומספריים Uniband, להפריד את שריר gastrocnemius מן העצמות, יצירת מכסה שרירי.
הסוליה תהיה בצד הפנימי של המכסה השרירי. זה יכול להיות מזוהה כי זה אדום ושטוח. עם זוג פינצטה ביולוגית, להגיע ולהרים את גיד הסוליה שנמצא מעל gastrocnemius.
תחתוך את הגיד עם מספריים יוניבנד. הרם את כל השריר תוך חיתוך כמה נקודות התקשרות חלשות. לבסוף, כדי לשחרר לחלוטין את שריר הסוליה, לחתוך את ארס הסוליה היוצר את הגיד הקלקלינלי.
חזור על שלב הקיבעון כפי שנעשה עם שריר EDL. כדי להשתמש בשיטה זו, חשוב לאבטח את הסיכות לגידים ולא לשריר. לאחר התקופה של 24 שעות של קיבעון עבר, לשטוף את השרירים בתמיסת DPBS לפני תחילת לבודד את סיבי השריר.
על מנת לבודד את הסיבים, להחזיק בעדינות את אחד הגידים עם זוג אחד של פינצטה ביולוגית. ואז עם זוג אחר של פינצטה ביולוגית, להתחיל לאט לצבוט את הגיד כדי להפריד את סיבי השריר. כדי לבודד את הסיבים, למשוך לאט כלפי מעלה לכיוון גיד השריר הנגדי.
יהיה צורך לחזור על פעולה זו מספר פעמים עד לקבלת חבילות מרובות, קטנות ומבודדות. לאחר שהופרדו בחבילות מבודדות קטנות, הניחו אותם בזהירות בשקופית סילאנית שטופלה מראש. יש צורך לשמור על כל הסיבים מסודרים, כך שהם לא חופפים.
בשלב זה, הסיבים ניתן להשאיר אוויר יבש במשך 24 שעות. לאחר 24 שעות, להתחיל את החיסונים. כדי ליצור מחסום עמיד למים, השתמש בעט PAP כדי להקיף את סיבי השריר המבודדים בשקופית שטיפסה מראש.
זוהי דוגמה לתמונה קונפוקלית ברזולוציה גבוהה שניתן להשיג בעקבות הפרוטוקול המתואר כאן. בפינה השמאלית העליונה, האלמנט הפוסט-סינפטי מוצג, ובפי ימין העליון, הרכיב הטרום-סינפטי, בעוד שהתמונות התחתונות מציגות את הרכיבים הסינפטיים שסוכמו כדי להמחיש את הפרמטרים שישמשו לניתוח מורפומטרי. השקופית השנייה מציגה את המיזוג של האותות שלפני ופוסט-סינפטיים עם כתם הגרעינים של ה- API.
הבדלים בין הצמתים הנוירו-שריריים של בעלי חיים מהונדסים ובעלי חיים לא מהונדסים נראים בבירור. הניתוח המורפומטרי של צמתים עצביים-שריריים מראה ראיות לאות הפוסט-סינפטי בבעלי חיים מהונדסים ונראה קומפקטי יותר, בעיקר בשל צומת נוירו-שרירי מופחת שטח כולל. כפי שמוצג כאן, האזור הטרום-סינפטי של החיה הטרנסג'נדרית מצטמצם.
הקטן ביותר שזוהה היה זה שנמצא עם אות נוירופילמנט אנטי זרחן, כפי שמוצג בתמונה B, למשל. התמונה האחרונה מציגה את התוצאות הנוגעות למצבם של צמתים עצביים-שריריים בהר שלם. באמצעות מדד הכיסוי, נקבע כי הצמתים הנוירו-שריריים מהונדסים נמצאו מושחתים חלקית.
כמו כן, זה יכול לקבוע כי הכיסוי ואת הקשר של neurofilament זרחן הוא נמוך יותר מאשר הושג כאשר neurofilament שאינו זרחן מזוהה. הפרוטוקול המוצע מאפשר קבלת הכנות צומת נוירו-שריריות באיכות גבוהה מסיבי שריר איטיים ומהירים. רכיבי צומת נוירו-שרירית לפני ואחרי סינפטי זוהו על ידי בדיקות או נוגדנים ספציפיים, ולאחר מכן צולמו במיקרוסקופיה קונפוקלית קונפוקלית או סופר-רזולוציה, המאפשרת ניתוח מורפומטרי בקנה מידה מיקרומטרי.
