像哺乳动物一样,在家禽胚胎发生期间,肌肉纤维数量是最终肌肉质量的主要决定因素。这种方法允许研究人员研究家禽的卵肌发生和肌肉纤维增生的操作。这种技术需要很少的设备投资,是一种简单且成本相对较低的研究肌生成操作的方法。
这种技术的新研究人员可能难以正确孵化卵子。展示这项技术的将是我和Morgan Gravely,他们都是我们实验室的理学硕士研究生。在开始实验之前,检查并丢弃质量差的鸡蛋。
为所选种蛋分配并记录单个种蛋数量,然后称量种蛋的重量。接下来,将种蛋放在适当的孵化盘中,并在26.6摄氏度和40%相对湿度下预孵化六小时。孵育后,增加并保持培养箱温度在37摄氏度,相对湿度为40%,直到孵育第18天。
用热表面温度计测量整个孵化器中几个种蛋的表面温度,每天两次,以确保种蛋的表面温度为37摄氏度。通过每小时轮换来继续重新定位卵子。为确保卵子重量减轻 10%至 12.5%,请在孵化的前 18.5 天内每天记录种蛋重量。
在孵育的第10天,按照手稿所述在卵形注射处理中制备每100微升所需的烟酰胺核苷溶液,并将溶液保持在37摄氏度的水浴中。从孵化器中一次取出一个托盘的鸡蛋,并用温热的毛巾覆盖后,蜡烛每个鸡蛋以找到蛋黄囊。用70%乙醇清洁注射区域,然后将无菌的20号2.54厘米皮下注射针头深插入蛋壳中,将指定剂量的烟酰胺核糖苷处理与100微升无菌盐水注入蛋黄囊中。
立即用一小块绝对防水胶带覆盖注射部位,避免水分过多流失。一旦所有种蛋都接受了处理,将托盘放回孵化器中。在孵化第18天,从托盘中取出种蛋,根据其处理方法将其放入指定的孵化箱中,然后将孵化箱放入孵化器中,湿度增加到60%,直到所有种蛋孵化或直到孵化的第23天。
在收集样品之前,通过将雏鸡侧放上头部,腿在身体下方并测量从头顶到尾部的长度来确定安乐死雏鸡的冠部到臀部的长度,然后测量从一个耳孔到另一个耳孔的头部宽度,从喙的后部到颅骨的后部。为了评估头围,将一根非弹性绳子从一个耳孔缠绕在头骨周围,然后用公制尺子获得绳子的测量值。同样,通过将绳子缠绕在翅膀接触身体的胸部周围来确定胸围,然后将绳子放在公制尺上以获取测量值。
用70%乙醇喷洒雏鸡的乳房,用手指拉动羽毛和皮肤以显示胸大肌,然后用数字卡尺进行测量。测量翅膀接触身体的胸部宽度以及从锁骨底部到脂肪垫顶部的胸部长度。要提取正确的胸大肌,使用手术剪刀或手术刀和镊子沿着龙骨切割,然后再将肌肉从体壁上释放出来。
取出胸大肌后,将肌肉平放在冰棍棒上,使用数字卡尺收集测量值。找出从颅骨到肌肉尾部的肌肉长度以及肌肉颅部最宽部分的肌肉宽度。为了确定肌肉厚度,用镊子拿起乳房,并在肌肉颅骨最厚的部分进行测量。
完成测量后,左右胸大肌可以储存在零下80摄氏度的进一步分析长达一年。将胚胎注射四种烟酰胺核苷剂量或剂量,以研究在蛋饲喂中的作用。观察到对第18天胚胎和孵化雏鸡的体重没有剂量影响。
同样,对第18天胚胎的胸大肌测量没有检测到剂量效应。对于孵化的雏鸡,对胸大肌长度和宽度测量没有剂量影响。然而,剂量确实影响了肌肉重量和深度。
从未注射烟酰胺核苷的胚胎发育而来的雏鸡具有胸大肌,其重量小于注射了501, 000毫摩尔烟酰胺核苷的胚胎中的雏鸡。注射了零摩尔和250毫摩尔烟酰胺核糖的胚胎雏鸡的胸大深度小于注射了501, 000毫摩尔烟酰胺核苷的胚胎的雏鸡。执行稳健实验的关键是选择无缺陷且均匀的种蛋。
这将确保所有效果都得到治疗催化。通过胸大肌的收获,组织学可用于测量肌肉纤维形态测量,并且可以提取总RNA和蛋白质用于基因和蛋白质表达分析。我们目前正在研究该技术对处理过的禽类新鲜肉质生长性能的影响。