Come i mammiferi, il numero di fibre muscolari, un importante determinante della massa muscolare finale è stabilito durante l'embriogenesi del pollame. Questo metodo consente ai ricercatori di studiare il pollame nella miogenesi ovo e nella manipolazione dell'iperplasia delle fibre muscolari. Questa tecnica richiede pochi investimenti in attrezzature ed è un metodo facile e relativamente economico per studiare la manipolazione della miogenesi.
I ricercatori nuovi a questa tecnica possono avere difficoltà a incubare correttamente le uova. A dimostrare questa tecnica saremo io e Morgan Gravely, entrambi studenti laureati in Master of Science nel nostro laboratorio. Prima di iniziare l'esperimento, ispezionare e scartare le uova di scarsa qualità.
Assegna e registra i singoli numeri di uova alle uova selezionate e quindi pesa le uova. Quindi, posizionare le uova nel vassoio di incubazione appropriato e pre-incubarle a 26,6 gradi Celsius con il 40% di umidità relativa per sei ore. Dopo l'incubazione, aumentare e mantenere la temperatura dell'incubatrice a 37 gradi Celsius con il 40% di umidità relativa fino al giorno di incubazione 18.
Misurare la temperatura superficiale di diverse uova in tutta l'incubatrice due volte al giorno con un termometro termico di superficie per garantire che la temperatura superficiale delle uova sia di 37 gradi Celsius. Continua a riposizionare le uova ruotando ogni ora. Per garantire una perdita di peso dell'uovo dal 10% al 12,5%, registrare il peso delle uova ogni giorno durante i primi 18,5 giorni di incubazione.
Il giorno 10 dell'incubazione, preparare la soluzione di nicotinamide riboside necessaria per ogni 100 microlitro nel trattamento con iniezioni di ovo come descritto nel manoscritto e mantenere le soluzioni a 37 gradi Celsius a bagnomaria. Dopo aver rimosso le uova un vassoio alla volta dall'incubatrice e aver coperto con un asciugamano caldo, candela ogni uovo per individuare il sacco vitellino. Pulire l'area di iniezione con etanolo al 70% prima di inserire un ago ipodermico sterile da 20 gauge 2,54 centimetri a un centimetro di profondità nel guscio d'uovo per iniettare la dose assegnata di trattamento con nicotinamide riboside con 100 microlitri di soluzione salina sterile nel sacco vitellino.
Coprire immediatamente il sito di iniezione con un piccolo pezzo di nastro impermeabile assoluto per evitare un'eccessiva perdita di umidità. Una volta che tutte le uova hanno ricevuto il loro trattamento, riposizionare il vassoio nell'incubatrice. Il giorno di incubazione 18, rimuovere le uova dai vassoi per posizionarle nelle scatole da cova assegnate in base ai loro trattamenti, quindi posizionare le scatole da cova nell'incubatrice con l'umidità aumentare al 60% fino a quando tutte le uova si schiudono o fino al 23 ° giorno dell'incubazione.
Prima della raccolta del campione, determinare la lunghezza della corona a groppa dei pulcini eutanasizzati, posando il pulcino su un fianco con la testa infilata verso il basso e le gambe sotto il corpo e misurando la lunghezza dalla parte superiore della testa alla coda, quindi misurare la larghezza della testa da un foro per l'orecchio all'altro foro dell'orecchio nella lunghezza della testa dalla parte posteriore del becco alla parte posteriore del cranio. Per valutare la circonferenza della testa, avvolgere una corda non elastica attorno al cranio da un foro dell'orecchio all'altro, quindi ottenere la misurazione della corda con un righello metrico. Allo stesso modo, determinare la circonferenza del torace avvolgendo una corda attorno al torace sotto il punto in cui le ali entrano in contatto con il corpo prima di posizionare la corda su un righello metrico per acquisire la misurazione.
Spruzza il seno del pulcino con il 70% di etanolo e, con le dita, tira le piume e la pelle per rivelare i muscoli principali pettorali seguiti da misurazioni con pinze digitali. Misura la larghezza del torace attraverso il torace in cui le ali entrano in contatto con il corpo e la lunghezza del torace dalla parte inferiore della clavicola alla parte superiore del cuscinetto di grasso. Per estrarre il muscolo maggiore pettorale destro, utilizzare forbici chirurgiche o bisturi e pinze per tagliare lungo l'osso della chiglia prima di rilasciare il muscolo dalla parete del corpo.
Dopo aver rimosso il muscolo maggiore pettorale, appoggiare il muscolo piatto su un bastoncino di ghiacciolo per raccogliere le misure utilizzando pinze digitali. Scopri la lunghezza muscolare dalla parte cranica a quella caudale del muscolo e la larghezza muscolare nella parte più ampia della parte cranica del muscolo. Per determinare lo spessore muscolare, raccogliere il seno con una pinza e misurare la parte più spessa della sezione cranica del muscolo.
Al termine delle misurazioni, i muscoli principali pettorali destro e sinistro possono essere memorizzati per ulteriori analisi a meno 80 gradi Celsius per un massimo di un anno. Gli embrioni sono stati iniettati con quattro dosi o dosi di nicotinamide riboside per studiare l'effetto dell'alimentazione ovo. È stato osservato che non vi erano effetti della dose sul peso corporeo degli embrioni del giorno 18 e dei pulcini nati.
Allo stesso modo, non sono stati rilevati effetti della dose sulle misurazioni muscolari principali pettorali per tutto il giorno 18 embrioni. Per i pulcini nati, non ci sono stati effetti della dose sulle principali misurazioni della lunghezza e della larghezza muscolare dei pettorali. Tuttavia, la dose ha influenzato il peso e la profondità muscolare.
I pulcini sviluppati dagli embrioni che non sono stati iniettati con nicotinamide riboside avevano muscoli pettorali maggiori che pesavano meno dei pulcini degli embrioni iniettati con 501.000 millimolari nicotinamide riboside. I pulcini provenienti da embrioni iniettati con nicotinamide riboside zero e 250 millimolari avevano una profondità maggiore pettorale inferiore rispetto ai pulcini provenienti da embrioni iniettati con 501.000 riboside millimolare di nicotinamide. La chiave per eseguire un esperimento robusto è selezionare uova prive di difetti e uniformi.
Ciò garantirà che tutti gli effetti siano catalizzati dal trattamento. Con la raccolta del muscolo maggiore pettorale, l'istologia può essere utilizzata per misurare la morfometria delle fibre muscolari e l'RNA totale e le proteine possono essere estratti per l'analisi dell'espressione genica e proteica. Attualmente stiamo studiando gli effetti di questa tecnologia sulle prestazioni di crescita della qualità della carne fresca degli uccelli trattati.
