Como mamíferos, número de fibra muscular, um dos principais determinantes da massa muscular final é estabelecido durante a embriogênese de aves. Este método permite que os pesquisadores estudem aves em ovo miogênese e manipulação da hiperplasia de fibra muscular. Esta técnica requer pouco investimento em equipamentos e é um método fácil e relativamente de baixo custo para estudar a manipulação da miogênese.
Os pesquisadores novos nessa técnica podem ter dificuldade em incubar adequadamente os ovos. Demonstrando que essa técnica seremos eu e Morgan Gravely, ambos estudantes de pós-graduação em Ciências em nosso laboratório. Antes de iniciar o experimento, inspecione e descarte os ovos de má qualidade.
Atribua e grave números individuais de ovos nos ovos selecionados e, em seguida, pese os ovos. Em seguida, coloque os ovos em sua bandeja de incubação apropriada, e pré-incuba-os a 26,6 graus Celsius com 40% de umidade relativa por seis horas. Após a incubação, aumente e mantenha a temperatura da incubadora a 37 graus Celsius com 40% de umidade relativa até o dia da incubação 18.
Meça a temperatura da superfície de vários ovos em toda a incubadora duas vezes por dia com um termômetro de superfície térmica para garantir que a temperatura da superfície dos ovos seja de 37 graus Celsius. Continue reposicionando os ovos girando a cada hora. Para garantir a perda de peso de 10% a 12,5%, registo os pesos dos ovos diariamente durante os primeiros 18,5 dias de incubação.
No dia 10 da incubação, prepare a solução riboside de nicotinamida necessária para cada 100 microliter no tratamento de injeções de ovo, conforme descrito no manuscrito e mantenha as soluções a 37 graus Celsius em um banho de água. Depois de remover os ovos uma bandeja de cada vez da incubadora, e cobrir com uma toalha quente, vela cada ovo para localizar o saco de gema. Limpe a área de injeção com 70% de etanol antes de inserir uma agulha hipodérmica de 20 metros de calibre 20 estéril de 2,54 centímetros de profundidade na casca do ovo para injetar a dose atribuída de tratamento ribosídeo de nicotinamida com 100 microliters de soro fisiológico estéril no saco de gema.
Imediatamente cobriu o local da injeção com um pequeno pedaço de fita impermeável absoluta para evitar perda excessiva de umidade. Uma vez que todos os ovos tenham recebido seu tratamento, coloque a bandeja de volta na incubadora. No dia 18, retire os ovos das bandejas para colocá-los nas caixas de eclosão atribuídas de acordo com seus tratamentos, em seguida, coloque as caixas de eclosão na incubadora com o aumento da umidade para 60% até que todos os ovos eclodam ou até o 23º dia da incubação.
Antes da coleta da amostra, determine a coroa para o comprimento da garupa dos filhotes eutanizados colocando o filhote de lado com a cabeça enfiada para baixo e as pernas sob o corpo e medindo o comprimento do topo da cabeça para a cauda, em seguida, meça a largura da cabeça de um orifício de ouvido para o outro orifício da cabeça da parte traseira do bico para a parte de trás do crânio. Para avaliar a circunferência da cabeça, enrole uma corda não elástica ao redor do crânio de um orifício de ouvido para o outro e, em seguida, obtenha a medição da corda com uma régua métrica. Da mesma forma, determine a circunferência do peito envolvendo uma corda ao redor do peito sob onde as asas entram em contato com o corpo antes de colocar a corda em uma régua métrica para adquirir a medição.
Borrife os seios do filhote com 70% de etanol, e com os dedos, puxe as penas e a pele para revelar os músculos principais da peitoral seguidos de medições com pinças digitais. Meça a largura do peito através do peito onde as asas entram em contato com o corpo e o comprimento do peito da parte inferior da clavícula até o topo da almofada de gordura. Para extrair o músculo peitoral direito, use tesoura cirúrgica ou bisturi e fórceps para cortar ao longo do osso da quilha antes de liberar o músculo da parede do corpo.
Depois de remover o músculo peitoral principal, coloque o músculo plano em uma vara de picolé para coletar as medidas usando pinças digitais. Descubra o comprimento muscular do craniano para a parte caudal do músculo e a largura muscular na porção mais larga da parte craniana do músculo. Para determinar a espessura muscular, pegue a mama com fórceps e meça na porção mais grossa da parte craniana do músculo.
Quando feito com as medidas, os músculos principal do peitoral direito e esquerdo podem ser armazenados para análises adicionais a menos 80 graus Celsius por até um ano. Os embriões foram injetados com quatro doses de nicotinamida ribosídeos ou dose para estudar o efeito da alimentação ovo. Observou-se que não houve efeitos de dose no peso corporal do dia 18 embriões e filhotes eclodidos.
Da mesma forma, não foram detectados efeitos de dose nas medidas musculares principais do peitoral para todos os embriões do dia 18. Para os filhotes eclodidos, não houve efeitos de dose nos peitorals principais comprimento muscular e medidas de largura. No entanto, a dose afetou o peso e a profundidade muscular.
Os filhotes desenvolvidos a partir dos embriões que não foram injetados com nicotinamida riboside tinham músculos peitoralis principais que pesavam menos que os filhotes dos embriões injetados com 501.000 milimãe nicotinamida riboside. Os filhotes de embriões injetados com zero e 250 milimões de nicotinamida riboside tinham menos peitorale de maior profundidade do que os filhotes de embriões injetados com 501.000 milimãe nicotinamida riboside. A chave para executar um experimento robusto é selecionar ovos livres de defeitos e uniformes.
Isso garantirá que todos os efeitos sejam catalisados no tratamento. Com a colheita do músculo peitoral principal, a histologia pode ser usada para medir a morfometria de fibra muscular, e o RNA total e proteína podem ser extraídos para análise de expressão genética e proteica. Atualmente, estamos estudando os efeitos dessa tecnologia no desempenho de crescimento na qualidade da carne fresca das aves tratadas.
